Informazione

Soluzione acquosa all'1% di acido desossicolico. Com'è preparato?

Soluzione acquosa all'1% di acido desossicolico. Com'è preparato?


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

Secondo Sigma, la solubilità dell'acido desossicolico è:

0,24 g/L in acqua a 15C

Secondo la FDA, Kybella (marchio di fabbrica) è una soluzione acquosa all'1% di acido desossicolico. Come hanno fatto questo?


Secondo il documento sigma a cui hai fatto riferimento (enfasi aggiunta da me):

"L'acido libero è solubile a 0,24 g/L in acqua a 15ºC, mentre il sale sodico è solubile a >333 g/L in acqua a 15ºC. Pertanto, Il controllo del pH è molto importante per l'uso di questo prodotto. Le soluzioni acquose precipitano quando il pH viene abbassato a 5."

Secondo il documento della FDA (enfasi aggiunta da me):

"Ogni flaconcino da 2 ml di KYBELLA® (acido desossicolico) per iniezione contiene 20 mg di acido desossicolico sintetico come ingrediente attivo e i seguenti ingredienti inattivi: alcool benzilico (18 mg), fosfato di sodio dibasico (2,84 mg), cloruro di sodio (8,76 mg), idrossido di sodio (2,86 mg) in acqua per preparazioni iniettabili, USP. Acido cloridrico e idrossido di sodio aggiuntivo vengono aggiunti secondo necessità per regolare la formulazione a pH 8,3."

La solubilità di 0,24 g/L in acqua a 15ºC è determinata dalla dissoluzione dell'acido libero in acqua pura. Quando si dissolve un acido in acqua pura, il pH si abbassa progressivamente e, poiché questo composto è meno solubile a pH più basso, limita la propria solubilità in acqua pura.

L'idrossido di sodio nel KYBELLA è una base forte, che aumenta il pH e, quando miscelato con l'acido desossicolico, forma un sale di sodio acquoso e acqua tramite una reazione acido-base. La base coniugata dell'acido desossicolico in soluzione acquosa è il desossicolato. Questa porzione del composto rimane invariata, indipendentemente dal fatto che faccia parte di un acido libero o di un sale sodico. Il fosfato di sodio è un composto tampone che aiuta a stabilizzare il pH e consente una regolazione più fine per controllare il pH finale per garantire che rimanga solubile.


Acqua purificata

Acqua purificata

L'acqua purificata è destinata all'uso nella formulazione di medicinali che non sono destinati ad essere sterili e apirogeni. L'acqua purificata è ampiamente utilizzata per prodotti orali e topici e nei processi di granulazione per compresse e capsule. È anche l'acqua di alimentazione per la produzione di acqua per preparazioni iniettabili (WFI) e per vapore pulito di grado farmaceutico. L'acqua purificata viene utilizzata anche per il risciacquo delle attrezzature e per la preparazione di soluzioni detergenti. Il limite di azione microbica in Europa è di 100 cfu/mL (equivalente a 10.000 cfu/100 mL, dato che il metodo di prova principale è la filtrazione su membrana). Negli Stati Uniti, i compendi raccomandano che il limite sia fissato dalla valutazione del rischio.

L'acqua purificata viene preparata mediante osmosi inversa. Le unità di osmosi inversa utilizzano una membrana semipermeabile e un sostanziale differenziale di pressione per guidare l'acqua attraverso la membrana per ottenere miglioramenti della qualità di sostanze chimiche, microbiche ed endotossine. I sistemi esistono in più formati di progettazione e sono spesso utilizzati in serie. L'osmosi inversa funziona come un filtro di esclusione delle dimensioni che opera in condizioni di alta pressione.


Chimica delle Rocky Star

L'acido acetico glaciale è acido acetico al 99,6% (p/v) ed è 17,4 M.

1 M - Aggiungere 57,5 ​​ml di acido acetico glaciale a 800 ml di acqua e poi portare a 1 litro con acqua.

0,05 N - Aggiungere 2,87 ml di acido acetico glaciale a 800 ml di acqua e poi portare a 1 litro con acqua.

0,9 M - Aggiungere 54 ml di acido acetico glaciale a 800 ml di acqua e poi portare a 1 litro con acqua.

7% (p/v) - Aggiungere 70 mL di acido acetico glaciale a 800 mL di acqua e quindi portare a 1 litro con acqua.

45% (p/v) - Aggiungere 450 ml di acido acetico glaciale a 500 ml di acqua e poi portare a 1 litro con acqua.

(15:60:25) - Unire 150 mL di acido acetico glaciale, 600 mL di n-butanolo e 250 mL di acqua.

Aggiungere 2,0 grammi di orceina a 45 ml di acido acetico glaciale. Portare a bollore e continuare a scaldare fino a completa dissoluzione. Raffreddare e aggiungere 55 ml di acqua distillata. Filtrare prima dell'uso. Nota: alcuni dei primi ricercatori hanno aggiunto un sale di ferro (come il citrato ferrico) come mordente. Tende ad aumentare l'intensità della colorazione aceto-orceina. La stessa reazione può essere ottenuta sminuzzando il materiale vegetale con una lama di rasoio in acciaio più vecchio (non inossidabile).

Aggiungere 1,0 mL di HCl concentrato a 100 mL di alcol etilico al 70% (v/v).

Reagente acido orcinolo (0,1% FeCl 3 in 10% HCl)

Aggiungere 0,1 grammi di FeCl 3 a 50 mL di HCl 10% (v/v) e portare a 100 mL con HCl 10%.

Le soluzioni di acrilammide per PAGE sono date come concentrazione totale di acrilammide (acrilammide + bisacrilammide) e la quantità di reticolante (bisacrilammide). Questo è indicato come rapporto T:C. Ad esempio, un gel al 10% (10%T:5%C) conterrebbe un totale di 10 g di acrilammide per 100 ml e sarebbe composto da 5 grammi di acrilammide e 5 grammi di bisacrilammide. Solitamente si produce una soluzione madre al 30% di acrilammide contenente lo 0,8% di bis-acrilammide. Molti ricercatori usano 30 grammi di acrilammide più 0,8 grammi di bis-acrilammide per 100 ml di acqua, ma 29,2 grammi di acrilammide più 0,8 grammi di bis sarebbero tecnicamente corretti. In pratica, fa poca differenza poiché i gel sono diluiti al 10% o meno. La soluzione madre al 30% viene filtrata attraverso un filtro da 0,45 e conservata a 4°C al buio. Per l'uso, la soluzione madre viene diluita con un tampone appropriato (di solito un Tris-HCl 2X). La soluzione stock è stabile per circa un mese. Scartare dopo questo periodo. SDS, -mercaptoetanolo e un colorante tracker (blu di bromofenolo) vengono aggiunti in vari punti.

Blu Alcian (MW appq. 1300)

0.001 M - Sciogliere 0,13 grammi di Alcian Blue 8GX (Sigma # A-2899) in 100 mL di acqua.

Reagente alcolico orcinolo (10% orcinolo in 95% etanolo)

Sciogliere 1,0 grammo di orcinolo in etanolo al 95% fino a un volume finale di 10 ml.

Aggiungere un pellet di NaOH a 1 litro di acqua distillata.

Soluzione alcalina per bande G

Sciogliere 2,8 grammi di NaOH e 6,2 grammi di NaCl fino ad un volume finale di 1 litro con acqua.

Acido aminosalicico (PAS MW 175,1)

6% (p/v) - Sciogliere 6,0 grammi di PAS fino a un volume finale di 100 mL con acqua o tampone.

0,1 M - Aggiungere 7,708 grammi di acetato di ammonio ad un volume finale di 1 litro d'acqua.

Persolfato di ammonio (MW 228,2)

10% (p/v) - Sciogliere 1,0 grammi di persolfato di ammonio fino a un volume finale di 10 mL con acqua. Mescolare fresco, prima dell'uso come catalizzatore per PAGE. Normalmente ad ogni 15 di soluzione gel per la polimerizzazione vengono aggiunti circa 50 1 di ammonio persolfato. Sciogliere 0,13 grammi di Alcian Blue 8GX (Sigma # A-2899) in 100 mL di acqua.

Solfato di ammonio (MW 132,14)

2% (p/v) - Aggiungere 2 grammi di solfato di ammonio a un volume finale di 100 ml di acqua.

4.1M(sat.) 0.001 M - Sciogliere 542 grammi di solfato di ammonio fino ad un volume finale di 1 litro.

Alcool n-amilico (Pentanolo C 5 H 11 OH - MW 88,15)

0,38 M - L'alcol amilico può essere pesato (33,5 grammi) o misurato volumetricamente utilizzando la densità. Cioè, 33,5 grammi = 0,8144 grammi/mL o 41,1 mL di alcol n-amilico. Pesare o misurare la quantità appropriata e diluire fino a un volume finale di 1 litro con acqua.

1% (p/v) - Sciogliere 0,5 grammi di amilasi fino a un volume finale di 50 mL con tampone fosfato di sodio 0,01 M, pH 7,0.

2 mM - Sciogliere 35,2 mg di acido ascorbico ad un volume finale di 100 mL con acqua.

ATP (Adenosina trifosfato, MW 507.21)

5 mM - Sciogliere 254 mg di ATP fino a un volume finale di 100 mL con acqua o tampone. Sciogliere 35,2 mg di acido ascorbico fino a un volume finale di 100 mL con acqua.

Aggiungere 1,0 g di cloruro di calcio, 1,0 g di cloruro di cadmio e 10 ml di formalina concentrata a 75 ml di acqua. Portare ad un volume finale di 100 ml con acqua.

8 mM - Sciogliere 98 mg di acido benzoico ad un volume finale di 100 mL con acqua o tampone.

Bis-acrilammide (N, N'-metilene-bis-acrilammide)

Cross linker per gel di acrilammide.

Aggiungere 1,50 grammi di Cu 2 SO 4 H 2 O e 6,0 grammi di tartrato di sodio e potassio a 500 ml di acqua. Preparare separatamente 300 mL di NaOH al 10% (p/v) sciogliendo 300 grammi di NaOH a un volume finale di 300 mL con acqua. Unire le due soluzioni in un volumetrico da 1 litro, agitare per mescolare e portare a 1 litro con acqua. Conserva la soluzione finale in una bottiglia di plastica scura. Scartare se si forma un precipitato nero o rosso.

Sono disponibili molti gradi di BSA e occorre prestare attenzione quando si utilizza questa proteina. Per gli standard di concentrazione proteica di routine, può essere utilizzata una frazione pura al 96-99% (Sigma # A 2153). Per la coltura tissutale, la RIA o la standardizzazione del peso molecolare, è necessario ottenere la BSA che viene estratta e purificata appositamente per tale scopo.

1% (p/v) - Sciogliere 0,5 grammi di BSA a un volume finale di 50 mL in acqua o tampone.

Questa procedura utilizza uno spostamento dell'assorbanza in una soluzione acida di Coomasie Blue. È disponibile in commercio dalla Pierce Chemical Company, Rockford, Illinois come Protein Assay Reagent, Cat. # 23200. Contiene metanolo e agenti solubilizzanti ed è molto affidabile. Se desideri crearne uno tuo, sciogli 100 mg di Coomasie Brilliant Blue G-250 in 50 ml di etanolo al 95%. Aggiungere 100 ml di acido fosforico all'85% e portare ad un volume finale di 1 litro con acqua distillata.

Blu di bromofenolo (sale sodico, MW 692.0)

0,001 (p/v) - Sciogliere 1 mg di blu di bromofenolo, sale sodico (Sigma # B7021) fino a un volume finale di 100 ml con acqua o tampone.

n-butanolo (C 4 H 9 OH - MW 74,12)

1,1 M - Il butanolo può essere pesato (81,5 grammi) o misurato volumetricamente utilizzando la densità. Cioè, 81,5 grammi = 0,8098 grammi/mL o 100,7 mL di n-butanolo. Pesare o misurare la quantità appropriata e diluire fino a un volume finale di 1 litro con acqua.

Questa è una soluzione salina di base per i nematodi. Sciogliere 11,36 grammi di Na 2 HPO 4 7 H 2 O, 3,0 grammi di KH 2 PO 4 , 0,5 grammi di NaCl e 1,0 grammi di NH 4 Cl ad un volume finale di 1 litro. Regolare il pH a 7,0. Può essere sterilizzato in autoclave.

Cloruro di calcio (MW 110,99)

0,0033 M - Sciogliere 0,522 grammi di acetato di calcio fino al volume finale di 1 litro con acqua o tampone.

0.001 M - Sciogliere 0,111 grammi di cloruro di calcio anidro fino ad un volume finale di 1 litro con acqua o tampone.

0,08 M ​​- Sciogliere 8.879 grammi di cloruro di calcio anidro fino ad un volume finale di 1 litro con acqua o tampone.

2% (p/v) - Sciogliere 2 grammi di cloruro di calcio anidro fino a un volume finale di 100 mL con acqua o tampone.

cAMP (Adenosina monofosfato, ciclico - MW 329.22)

0.001 M (1 mM) - Sciogliere 33 mg di cAMP a un volume finale di 100 ml con acqua, tampone o terreno.

Combinare 10,0 ml di acido acetico glaciale con 60,0 ml di alcol etilico assoluto e 30,0 ml di cloroformio.

Tampone di omogeneizzazione del cloroplasto

A 400 ml di acqua distillata, aggiungere 30,058 grammi di sorbitolo, 2,23 grammi di pirofosfato di sodio, 0,407 grammi di cloruro di magnesio e 0,176 grammi di acido ascorbico. Regolare il pH a 6,5 ​​con HCl e diluire fino a un volume finale di 500 mL.

Tampone di sospensione del cloroplasto

A 400 ml di acqua distillata, aggiungere 30,058 grammi di sorbitolo, 0,372 grammi di EDTA, 0,102 grammi di cloruro di magnesio e 5,958 grammi di tampone HEPES. Regolare il pH a 7,6 con NaOH e diluire fino a un volume finale di 500 ml.

Gelatina di allume di cromo (Soluzione di sublimazione)

Sciogliere 5,0 grammi di gelatina in 1 litro di acqua bollente. Raffreddare e aggiungere 0,5 grammi di allume di cromo potassio [CrK(SO 4 ) 2 12 H 2 O]. Conservare in frigorifero. Per l'uso, immergere i vetrini puliti nella soluzione e asciugarli in posizione verticale in un luogo privo di polvere.

Acido citrico (H 3 C 6 H 5 O 7 H 2 O - MW 210,14)

0,1 M - Sciogliere 21,01 grammi di acido citrico fino al volume finale di 1 litro.

Tampone citrato (tampone sodio fosfato-citrato)

Ph 4.8 - Aggiungere 493.0 mL di 0.2 M Na 2 HPO 4 a 507 mL di 0.1 M di acido citrico.

Ph 3.6 - Aggiungere 322,0 ml di 0,2 M Na 2 HPO 4 a 678 ml di acido citrico 0,1 M.

Ph 4.2 - Aggiungere 414,0 ml di 0,2 M Na 2 HPO 4 a 586 ml di acido citrico 0,1 M.

Ph 5,4 - Aggiungere 557,5 ml di 0,2 M Na 2 HPO 4 a 442,6 ml di acido citrico 0,1 M.

Ph 6.0 - Aggiungere 631,5 mL di 0,2 M Na 2 HPO 4 a 368,5 mL di 0,1 M di acido citrico.

Ph 6.6 - Aggiungere 727,5 ml di 0,2 M Na 2 HPO 4 a 272,5 ml di acido citrico 0,1 M.

Ph 7,2 - Aggiungere 869,5 mL di 0,2 M Na 2 HPO 4 a 130,5 mL di acido citrico 0,1 M.

Ph 7,8 - Aggiungere 957,5 ml di 0,2 M Na 2 HPO 4 a 42,5 ml di acido citrico 0,1 M.

Nitrato di cobalto (MW 182.96)

2% (p/v) - Sciogliere 2,0 grammi di nitrato di cobalto (l'esaidrato è molto solubile) fino a un volume finale di 100 ml con acqua. Conservare ben chiuso in luogo fresco.

10 g/mL - Sciogliere 10 g di colcemid per mL di soluzione fisiologica o terreno di coltura.

Blu Coomasie (Blu Coomasie Brilliant R250)

0,25% (p/v) 0,001 M - Sciogliere 2,50 grammi di Coomasie Brilliant Blue R250 fino a un volume finale di 1 litro con acido tricloroacetico (TCA) al 20% (p/v). Alcuni ricercatori utilizzano una soluzione allo 0,25% di Coomasie Blue in metanolo-acqua-acido acetico glaciale (5-5-1).

Solfato di rame (CuSO 4 . 5H 2 O MW 249,68)

0,5% (p/v) - Sciogliere 0,13 grammi di Alcian Blue 8GX (Sigma # A-2899) in 100 mL di acqua.

0,5% (p/v) - Sciogliere 0,5 grammi di solfato di rame fino a un volume finale di 100 mL con acqua.

Tartrato/carbonato di rame (CTC)

Sciogliere 0,5 grammi di solfato di rame e 1,0 grammi di tartrato di sodio e potassio fino a un volume finale di 100 ml con acqua. Unire 1,0 mL di questa soluzione con 50 mL di Na 2 CO 3 al 2% in NaOH 0,1 N. Deve essere fatto fresco, prima dell'uso. Le soluzioni stock sono stabili.

Sciogliere 0,1 grammi di cristalvioletto e 0,25 mL di acido acetico glaciale fino a un volume finale di 100 mL con acqua.

DCMU [3-(3,4-Diclorofenil)-1,1-Dimetilurea - PM 233.1]

1 x 10 -4 M 0,001 M - Sciogliere 2,3 mg DCMU fino a un volume finale di 100 mL con acqua o tampone.

5 x 10 -7 M0.001 M - Diluire la soluzione 1 x 10 -4 M 1/200 prima dell'uso.

Diclorofenolindofenolo (DCPIP - MW 290,1)

0.0025 M - Sciogliere 73 mg di DCPIP ad un volume finale di 100 mL con acqua o tampone.

0,0001 M - Sciogliere 2,9 mg di DCPIP ad un volume finale di 100 mL con acqua o tampone.

Dinitrofenolo (DNP - MW 184.11)

18,4 mg% - Sciogliere 18,4 mg di 2,4-dinitrofenolo fino a un volume finale di 100 mL con acqua o tampone.

Dische difenilammina reagente

Sciogliere 500 mg di difenilammina in 49 mL di acido acetico glaciale. Aggiungere 1,0 mL di HCl concentrato.

Ditiotreitolo (Reagente di Cleland - MW 154.3)

0,01 M - Sciogliere 154 mg di ditiotreitolo ad un volume finale di 100 mL con acqua o tampone. Il ditiotreitolo è disponibile da Sigma Chemical Co., St. Louis, Cat # D0632. Il ditioeritritolo può essere sostituito.

DOPA [3-(3,4-diidrossifenil)-L-alanina - MW 197,19]

8 mM - Sciogliere 158 mg di L-DOPA ad un volume finale di 100 mL con acqua o tampone. Si noti che la solubilità massima di DOPA in acqua è 165 mg/100 mL (8,3 mM).

EDTA (Acido etilendiamminotetraacetico - MW 292.24)

1 M - Sciogliere 292,24 grammi di EDTA, acido libero fino al volume finale di 1 litro. Se si utilizza il sale disodico più solubile dell'EDTA, regolare il peso di conseguenza. Il pH può essere regolato con acido acetico o NaOH. Per diluizioni di concentrazione corrispondenti, moltiplicare il peso in grammi per la molarità desiderata. Ad esempio, per EDTA 10 mM, moltiplicare 292,24 X 0,010 per ottenere 2,92 grammi di EDTA per litro.

EGTA [Acido etilenglicole-bis(amminoetil etere) N,N N'N'-tetraacetico - MW 380,4]

1 mM - Sciogliere 380 mg di EGTA ad un volume finale di 1 litro con acqua o tampone.

0,5% (p/v) - Sciogliere 0,5 grammi di Eosina Y in 100 mL di acqua.

Etanolo (C 2 H 3 OH - MW 46,07)

50-95% (v/v) - Poiché l'alcol etilico al 95% è meno costoso e più facile da conservare rispetto all'assoluto, queste diluizioni devono essere effettuate con alcol etilico al 95%. Salvo diversa indicazione, l'alcol denaturato funziona così come il più costoso non denaturato. Un modo semplice per preparare la soluzione % consiste nell'utilizzare la quantità appropriata di etanolo al 95% e diluire a 950 ml invece di 1 litro. Ad esempio, per ottenere una soluzione al 50% (v/v), misurare 500 mL di alcol etilico al 95% e diluire fino a un volume finale di 950 mL con acqua. Per una soluzione al 70%, misurare 700 ml di alcol etilico e diluire a 950 ml con acqua. L'etanolo assoluto deve essere utilizzato direttamente come etanolo al 100%. È importante per l'istologia che questo sia veramente al 100%. Poiché è igroscopico (assorbe acqua dall'aria), non dare per scontato che sia assoluto a meno che non sia sigillato o trattato per garantire l'assenza di acqua. Per testare, aggiungi una goccia a un campione di xilolo. In caso di intorbidamento, l'alcol non è assoluto.

8,5 M - L'etanolo può essere pesato [391.6 grammi di assoluto, 412,2 grammi di 95% (v/v)] o misurato volumetricamente utilizzando la densità. Cioè, 391,6 grammi = 0,7893 grammi/mL o 496,1 mL di etanolo assoluto. Usando il 95%, 412,2 grammi = 0,7893 grammi/mL o 522,2 mL. Pesare o misurare la quantità appropriata e diluire fino a un volume finale di 1 litro con acqua.

Fissativo acido etanolo-acetico per istologia (3:1)

A 75 ml di alcol assoluto, aggiungere 25 ml di acido acetico glaciale. Deve essere preparato fresco, appena prima dell'uso.

Sebbene sia possibile preparare il proprio siero da sangue intero, è più facile (e più sicuro) acquistare FCS da un fornitore affidabile. Le fonti commerciali sono prive di micoplasma, presterilizzate e controllate per la presenza di anticorpi. Sul mercato sono disponibili numerosi sostituti del siero e questi possono essere meno costosi se si considera lo stoccaggio. I fornitori includono Gibco, Flow Laboratories, KC Biological e Sigma Chemical Co.

Questo viene solitamente acquistato premiscelato, poiché è difficile da realizzare. Conosciuto anche come reagente 2N Folin-fenolo.

Preparare una soluzione madre sciogliendo 3,8 grammi di polvere di giemsa in 25 mL di glicerina. Riscaldare delicatamente con agitazione per circa 2 ore a 60°C. Raffreddare e aggiungere 75 mL di metanolo (neutro, senza acetone). Per una soluzione di lavoro, diluire la soluzione madre 1 /10 con acqua prima dell'uso. Per le bande cromosomiche, combinare 5,0 mL di stock Giemsa, 3,0 mL di metanolo assoluto, 3,0 mL di acido citrico 0,1 M e 89 mL di acqua distillata. Regolare il pH della soluzione a 6,6 con Na 2 HPO 4 .

10% (v/v) - Sciogliere 10 grammi di D-glucosio (destrosio) in un volume finale di 100 mL con acqua o tampone.

5% - GTA viene solitamente fornito come soluzione al 25% o 50% (p/v). Viene utilizzato per la fissazione al microscopio elettronico come soluzione al 5% in un tampone. Per l'uso di routine, aggiungere 20 ml di GTA al 25% a 80 ml di tampone di cacodilato di sodio 0,2 M, pH 7,4.

10% (v/v) - A 10 ml di glicerolo (glicerina) aggiungere abbastanza acqua per ottenere un volume finale di 100 ml.

8 M - Pesare 73,67 grammi di glicerolo e aggiungere a un volume finale di 100 ml. In alternativa, misurare 499,1 mL di glicerolo e portare ad un volume finale di 1 litro (la densità del glicerolo a temperatura ambiente è 1,476) con acqua o tampone. Per glicerolo 8 M in tampone MT, creare un tampone 2X MT da utilizzare come diluente.

0,192 M - Sciogliere 1,44 grammi di Glicina ad un volume finale di 100 mL con acqua o tampone.

Sciogliere 0,33 grammi di iodio e 0,67 grammi di ioduro di potassio fino a un volume finale di 100 ml con acqua.

HEPES [N-(2-idrossietil)piperazina-N'-(acido 2-etansolfonico) - PM 238,3]

50 mM - Sciogliere 11,92 grammi di HEPES, acido libero ad un volume finale di 1 litro. Se si utilizza sale emisodico, regolare il peso di conseguenza. Non utilizzare sali di sodio se non diversamente specificato. Il sale emisodico contiene 0,5 moli di sodio per ogni mole di HEPES.

pH7.6 - Sciogliere 2,38 grammi di HEPES, acido libero in 900 mL di acqua. Regolare il pH con NaOH o HCl a 7,6. Regolare il volume finale a 1 litro con acqua distillata.

Acido cloridrico (HCl - MW 36,46)

L'HCl concentrato ha una molarità di circa 11,6. L'HCl è un gas solubile in acqua e che si presenta sotto forma di HCl di grado reagente concentrato. Questa soluzione contiene circa il 36-38% (p/v) di HCl.

1 N - aggiungere 86 mL di HCl concentrato a 800 mL di acqua e diluire fino ad un volume finale di 1 litro.

0,1 N - diluire 1 N di un fattore 10.

% soluzioni, si noti che l'HCl liquido è solo il 38% di HCl, quindi una soluzione all'1% richiederebbe 2,6 mL di HCL concentrato (1/.38) per volume finale di 100 mL.

0,01% (p/v) - Sciogliere 10 mg di Janus Green B in 2-3 mL di etanolo assoluto. Diluire fino a un volume finale di 100 ml con acqua.

Ca 3 (NO 2 ) 4H 2 O - 4,0 grammi

H 2 O distillata - 1,0 litro

Na 2 MoO 4 2H 2 O - 25 mg

H 2 O distillata - 1,0 litro

FeC 6 H 5 O 7 5H 2 O - 2,5 grammi

1X Media - Aggiungere 250 mL di Knudson X4 a 750 mL di acqua distillata. Aggiungere 0,5 ml di elementi minori B5, 0,5 ml di fosfato di riserva e 0,4 ml di citrato ferrico. Regolare il pH a 5,5 con HCL, aggiungere 15 grammi di agar e scaldare per sciogliere. Autoclavare e versare nei piatti.

Krebs Ringer Fosfati (KPR)

Preparare separatamente ciascuno dei seguenti:

Tampone fosfato 0,1 M, pH 7,4 (17,8 grammi di Na 2 HPO 2 H 2 O

+ 20 mL di HCL 1 N, diluito a 1 litro)

Per mescolare, unire 200 mL di NaCl, 8 mL di KCl, 6 mL di CaCl 2 e 2 mL di MgSO 4 . Con attenzione, e con costante agitazione, aggiungere 40 mL di tampone fosfato.

Tampone LPS (tampone soluzione tampone inferiore)

Sciogliere 1,5 grammi di KCl, 0,5 grammi di MgCl 2 e 0,5 grammi di steptomicina solfato in 500 mL di acqua. Aggiungere 40 ml di tampone fosfato 1 M, pH 6,5 e diluire a 1 litro con acqua.

Cloruro di magnesio (MgCl 2 - MW 95,23)

1 mM - Sciogliere 95,2 mg di cloruro di magnesio per volume finale di 1 litro.

4 mM - Sciogliere 0,381 grammi di cloruro di magnesio per volume finale di 1 litro.

10 mM - Sciogliere 0,952 grammi di cloruro di magnesio per volume finale di 1 litro.

0,1 M - Sciogliere 9,523 grammi di cloruro di magnesio per volume finale di 1 litro.

Solfato di magnesio (MgSO 4 - MW 120,39)

5% (p/v) - Sciogliere 5,0 grammi di solfato di magnesio fino a un volume finale di 100 mL con acqua o tampone.

Acquista commercialmente o mescola con una delle seguenti procedure:

A. Sciogliere 1,0 grammi di ematossilina in 10 mL di etanolo assoluto. Sciogliere 20 grammi di allume di potassio (KAl(SO) 2 12H 2 O) in 200 mL di acqua. In una cappa chimica, con protezione contro le esplosioni, portare a ebollizione la soluzione di allume di potassio e aggiungere la miscela ematossilina/etanolo. Continuare a bollire per circa un (1) minuto. Aggiungere 0,5 grammi di ossido di mercurio e raffreddare rapidamente. Aggiungere 0,5 ml di acido acetico glaciale. Filtrare prima dell'uso. Questa miscela è stabile per circa due mesi.

B. In alternativa: sciogliere 5,0 grammi di ematossilina in 50 ml di etanolo assoluto e aggiungere a 650 ml di acqua calda. Riscaldare delicatamente fino a quando l'ematossilina si dissolve e quindi aggiungere 300 ml di glicerina, 0,3 grammi di iodato di sodio e 20 ml di acido acetico glaciale. Raffreddare e portare a volume fino a 1 litro con acqua distillata. Filtrare prima dell'uso.

0,5 M - Densità = 1,2 grammi/mL. Utilizzare 3,91 grammi OPPURE 3,26 ml di -mercaptoetanolo in un volume finale di 100 ml di acqua o tampone.

5% (p/v) - Utilizzare 5,0 grammi o 4,167 mL in un volume finale di 100 mL di acqua o tampone.

MES [acido 2-(N-Morfilino)etansolfonico - MW 195,2]

0,1 M - Sciogliere 1,952 grammi di MES ad un volume finale di 100 mL con acqua o tampone.

Metanolo (CH 3 OH - MW 32,04)

22 M - Il metanolo può essere pesato (704,9 grammi) o misurato volumetricamente utilizzando la densità. Cioè 704,9 grammi = 0,7914 grammi/mL o 890,7 mL di alcol metilico. Pesare o misurare la quantità appropriata e diluire fino a un volume finale di 1 litro con acqua.

Metanolo/acido acetico (per fissare le proteine ​​nei gel di acrilammide)

45%:12% - Aggiungere 120 mL di acido acetico glaciale a 450 mL di metanolo e diluire fino ad un volume finale di 1 litro con acqua.

Metanolo/acido acetico (per decolorare o fissare le proteine ​​nei gel di acrilammide)

5%:7% - Aggiungere 70 mL di acido acetico glaciale a 50 mL di metanolo e diluire fino ad un volume finale di 1 litro con acqua.

0,2% (p/v) - Sciogliere 0,2 grammi di verde metile fino a un volume finale di 100 mL con tampone acetato 0,1 M, pH 4,2.

Tampone per microtubuli (tampone MT)

Sciogliere 19,52 grammi di MES in 800 mL di acqua distillata. Aggiungere 0,380 grammi di EGTA e 47,62 grammi di MgCl 2 . Regolare il pH a 6,4 con HCL o NaOH e diluire fino a un volume finale di 1 litro con acqua distillata.

Mezzo minimo essenziale (MEM)

Per tutti gli scopi di questo manuale, MEM si riferisce a MEM di Eagle. Sebbene sia possibile miscelare questo mezzo, è infinitamente più facile (e meno costoso) acquistare il mezzo premiscelato da un numero qualsiasi di fonti commerciali (Gibco, Flow, KC Biological, Sigma Chemical). È essenziale che vengano utilizzati prodotti chimici della massima purezza.

Agar NG (agar per la crescita dei nematodi)

Sciogliere 3,0 grammi di NaCl, 2,5 grammi di peptone e 17 grammi di agar in un volume finale di 1 litro. Far bollire per sciogliere l'agar, sterilizzare in autoclave. Nel frattempo, preparare soluzioni sterili separate di:

10 mg/mL di colesterolo in etanolo

Tampone fosfato di potassio 1 M, pH 6.0

Utilizzando una tecnica sterile adeguata, raffreddare leggermente la soluzione di agar e aggiungere 1 mL di CaCl 2 , 1 mL di uracile, 0,5 mL di colesterolo, 25 mL di tampone fosfato e 1 mL di MgSO 4 . Agitare per mescolare tutti gli ingredienti e versare nei piatti.

Nitrofenilfosfato (MW 263.1)

0,05 M - Sciogliere 1,32 grammi di nitrofenil fosfato fino a un volume finale di 100 mL con acqua o tampone.

0,8% (p/v) - Sciogliere 0,8 grammi di nitrofenilfosfato in un volume finale di 100 mL di acqua o tampone.

Osmio tetrossido (OsO 4 - MW 254,2)

L'uso di una cappa è obbligatorio quando si utilizza OsO4. Il tetrossido di osmio fisserà rapidamente i passaggi nasali e la cornea esposta se non adeguatamente ventilato. Dovrebbe essere maneggiato con estrema cura.

1% - Il tetrossido di osmio è un gas che viene utilizzato in soluzione per la conservazione EM. È meglio acquistarlo in fiale sigillate da 2 mL di OsO . al 4%4. Per l'uso, aggiungere 6,0 ml di acqua o tampone ai 2,0 ml di tetrossido di osmio al 4%. Chiudete in un contenitore a chiusura ermetica, avvolto in un foglio di alluminio e conservate in frigorifero.

Acido perclorico (PCA - MW 100,47)

2% (p/v) - Sciogliere 2,0 grammi di PCA fino a un volume finale di 100 mL con acqua o tampone.

Silice colloidale rivestita in PVP. Disponibile da Sigma Chemical Co., St. Louis. Gatto. #P1644.

Acido periodico (Periodate - Usato per la reazione PAS)

Sciogliere 0,6 grammi di acido periodico in 100 ml di acqua e aggiungere 0,3 ml di acido nitrico concentrato.

Fenazina metosolfato (PMS - MW 306,34). Mutageno e irritante.

0,033% (v/v) - Aggiungere 33 l di fenazina metosolfato a 90 mL di acqua o tampone e portare a un volume finale di 100 mL. Deve essere effettuato immediatamente prima dell'uso.

Il fenolo provoca gravi ustioni e dissolve facilmente tutti i composti di plastica e gomma. Usare estrema cautela quando si maneggia questo composto.

Combina 555 ml di fenolo acquoso (o 500 grammi di cristalli di fenolo più 55 ml di acqua) con 70 ml di mcresolo. Aggiungere 0,5 grammi di 8-idrossichinolina.

Fenilendiamene ossalato (PPDO - MW 198.18)

0,02% (p/v) - Sciogliere 20 mg di PPDO fino a un volume finale di 100 mL con acqua o tampone.

Soluzione salina tamponata con fosfato (PBS)

Mescolare 100 mL di Ca+2 /Mg+2 di 10X PBSA libero con 800 mL di acqua distillata. A parte, sciogliere 0,1 grammi di cloruro di magnesio e 0,1 grammi di cloruro di calcio anidro fino a un volume finale di 100 mL con acqua. Con costante agitazione, aggiungere lentamente la soluzione di cloruro di magnesio/calcio al PBSA diluito. Se si forma un precipitato, ricominciare e aggiungere più lentamente mescolando continuamente.

Ca +2 /Mg +2 Soluzione salina tamponata con fosfato libero - 10X (10X PBSA)

Sciogliere 80 grammi di NaCl, 2,0 grammi di KCl, 15,0 grammi di fosfato di sodio dibasico e 2,0 grammi di fosfato di potassio monobasico in 1 litro di acqua distillata. Questo rende una soluzione 10X di soluzione salina tamponata con fosfato di Ca+2 /Mg+2. Diluire 1:10 prima dell'uso. Conservare in frigorifero.

Tampone fosfato salino-Tween 20 (4.8)

Mescolare PBS e aggiungere 0,1% (v/v) Tween 20.

Disponibile come lecitina di fagiolo. Viene tipicamente utilizzato come soluzione madre di 10-20 g/mL in soluzione salina bilanciata. Per la coltura dei tessuti deve essere sterilizzato a freddo prima dell'uso.

Cloruro di potassio (KCl - MW 74,55)

1 M - Sciogliere 74,55 grammi di KCl ad un volume finale di 1 litro con acqua o tampone. Per altre concentrazioni, moltiplicare il peso per la molarità richiesta. Ad esempio, per 0,150 M (150 mM), utilizzare 0,150 X 74,55 o 11,183 grammi di KCl in 1 litro di acqua o tampone. Usa la metà per ottenere 0,075 M per il cariotipo.

Cianuro di potassio (KCN - MW 65.11)

8 mM - Sciogliere 52 mg di KCN ad un volume finale di 100 mL con acqua o tampone.

Fosfato di potassio, monobasico (KH 2 PO 4 - MW 136,09)

0,01 M - Sciogliere 1,36 grammi di fosfato di potassio monobasico fino a un volume finale di 1 litro con acqua.

Fosfato di potassio, dibasico (K 2 HPO 4 - MW 174)

0,01 M - Sciogliere 1,74 grammi di fosfato di potassio dibasico ad un volume finale di 1 litro con acqua.

Tampone fosfato di potassio

0,01 M - pH 7,4 - Preparare 500 ml di 0,01 M K 2 HPO 4 e 500 ml di 0,01 M KH 2 PO 4 . Posizionare il KH 2 PO 4 su un agitatore magnetico e inserire un elettrodo di pH. Aggiungere lentamente K 2 HPO 4 per regolare il pH a 7,4.

Idrossido di potassio (KOH - MW 56.10)

0,5 N - Sciogliere 28,05 grammi di KOH fino al volume finale di 1 litro con acqua.

10% (p/v) - Sciogliere 10 grammi di KOH ad un volume finale di 100 mL con acqua. Conservare in un contenitore di plastica.

Tartrato di sodio e potassio - Sale di Rochelle (KNaC 4 H 6 O 6 4H 2 O - MW 282.23)

n-propanolo (C 3 H 7 OH - MW 60,11)

3 M - L'n-propanolo può essere pesato (180,3 grammi) o misurato volumetricamente utilizzando la densità. Cioè 180,3 grammi = 0,8035 grammi/mL o 224,4 mL di n-propanolo. Pesare o misurare la quantità appropriata e diluire fino a un volume finale di 1 litro con acqua.

Sciogliere 1,46 grammi di K 2 HPO 4 e 0,92 grammi di K 2 HPO 4 in 80 mL di acqua distillata. Aggiungere 2,5 grammi di albumina sierica cristallina e regolare il volume a 100 ml finali con acqua.

0,6% (p/v) - Sciogliere 0,6 grammi di pironina Y in 100 mL di acetone.

0,1% (p/v) - Sciogliere 10 mg di ribonucleasi pancreatica di tipo A in 10 mL di acqua o tampone. Utilizzare per il trattamento enzimatico delle sezioni istologiche facendo galleggiare 0,5-1,0 ml di questa soluzione sulla sezione, con il vetrino inserito in una piastra di Petri coperta.

Sciogliere 2,5 grammi di Safranin O in 10 mL di etanolo al 95% e diluire a 100 mL con acqua.

0,85% (p/v) - La soluzione salina si riferisce a una soluzione di NaCl, con l'uso più comune per ciò che è isotonico per le cellule del sangue dei mammiferi, in particolare una soluzione allo 0,85% o allo 0,9%. Per mescolare, sciogliere 8,5 grammi di NaCl fino a un volume finale di 1 litro con acqua.

Citrato salino ( 1 /10 diluizione di SSC)

Sciogliere 0,878 grammi di NaCl e 0,294 grammi di citrato di sodio fino ad un volume finale di 1 litro con acqua.

Tampone salino citrato (SSC)

20X - È comune preparare questo tampone come soluzione stock 20X, da diluire a 2X, 1X o 0,1X prima dell'uso. Per preparare una soluzione madre 20X, sciogliere 175 grammi di NaCl e 88 grammi di citrato di sodio in 900 mL di acqua. Regolare il pH a 7,0 con 1 N HCL e portare ad un volume finale di 1 litro. Per l'uso, come SSC 1X, diluire 1 parte di brodo 20X con 19 parti di acqua distillata. Per un SSC 2X, diluire 1 parte di brodo 20X con 9 parti di acqua.

Sciogliere 0,8 grammi di fucsina basica in 85 ml di acqua distillata. Aggiungere 1,9 grammi di metabisolfito di sodio e 15,0 mL di HCL 1 N. Mettere la soluzione in un imbuto separatore e agitare a intervalli di 2 ore per circa 12 ore. Aggiungere 200 grammi di carbone attivo, agitare per 1 minuto e filtrare la soluzione limpida. Se la soluzione è ancora rosa, aggiungi altri 100 grammi di carbone e agita per un altro minuto. Filtrare e conservare in una bottiglia scura. La soluzione deve essere limpida (nessuna colorazione rosa) per l'uso.

Sciogliere 2,0 grammi di bicarbonato di sodio e 20,0 grammi di solfato di magnesio in acqua fino a un volume finale di 1 litro. Aggiungere un pizzico di timolo per ritardare la crescita delle muffe.

Fare riferimento a Sodio laurilsolfato.

1X SDS-Electrophoresis Running Buffer

Diluire il tampone 5X Tris-Glycine a 1X e aggiungere 1,0 grammi di SDS per litro di 1X Tris-Glycine. Il pH dovrebbe essere 8,3 dopo la diluizione.

Sciogliere 1,52 grammi di base Tris, 2,0 grammi di SDS, 20 mL di glicerina, 2,0 mL di -mercaptoetanolo e 1 mg di blu di bromofenolo ad un volume finale di 100 mL con acqua.

Le pipette Pasteur possono essere siliconate immergendole in un becher contenente il 5% (v/v) di diclorodimetilsilano in cloroformio per circa 1 minuto. Scolare, scolare e sciacquare più volte con acqua distillata. Cuocere le pipette a 180 ° C per 2 ore e raffreddare prima dell'uso.

Soluzione di nitrato d'argento (per colorazione elettroforetica)

Sciogliere 0,15 grammi di NaOH in 150 mL di acqua. Aggiungere 3,5 ml di NH 4 OH concentrato e portare a un volume di 200 ml. A parte, sciogliere 2,0 grammi di nitrato d'argento in un volume finale di 10 ml. Con costante agitazione, aggiungere 8,0 mL del nitrato d'argento ai 200 mL di NaOH/NH 4 OH. Questa soluzione deve essere preparata immediatamente prima dell'uso e utilizzata entro 30 minuti.

Terreno di agar SM (mezzo per muffa melmosa di Sussman)

Sciogliere 10,0 grammi di glucosio, 10,0 grammi di peptone, 1,0 grammi di estratto di lievito, 1,0 grammi di MgSO 4 , 1,5 grammi di KH 2 PO 4 , 1,0 grammi di K 2 HPO 4 e 20,0 grammi di agar a un volume finale di 1 litro . Scaldare per sciogliere l'agar, autoclavare e distribuire su piastre Petri.

1 M - Sciogliere 82,04 grammi di acetato di sodio ad un volume finale di 1 litro con acqua o tampone.

0,02 M - Sciogliere 1,64 grammi di acetato di sodio fino al volume finale di 1 litro con acqua o tampone.

1 M - pH 5,7 - A 925 mL di acetato di sodio 1 M, aggiungere 75 mL di acido acetico 1 M.

0,01 M - Sciogliere 0,065 grammi di sodio azide ad un volume finale di 100 mL con acqua.

0,39% (p/v) - Sciogliere 0,39 grammi di sodio azide fino a un volume finale di 100 mL con acqua o tampone.

0,2% (p/v) - Sciogliere 0,2 grammi di barbitolo di sodio fino a un volume finale di 100 ml con acqua.

Bicarbonato di sodio (NaHCO 3 - MW 84,0)

0,1 M - Sciogliere 0,84 grammi di NaHCO 3 ad un volume finale di 100 mL con acqua o tampone.

0,2 M - pH 7,4 - Preparare una soluzione 0,2 M di acido cacodilico, sale sodico (MW 159,91). Sciogliere 3,20 grammi di acido cacodilico, sale sodico fino a un volume finale di 100 ml con acqua. Regolare il pH a 7,4 con HCL.

2% (p/v) - Sciogliere 2,0 grammi di carbonato di sodio fino a un volume finale di 100 mL con NaOH 0,1 N.

0,1 N NaOH - Utilizzato per il dosaggio delle proteine ​​Lowry.

M - Per una soluzione molare di cloruro di sodio, sciogliere 58,44 grammi di NaCl fino a un volume finale di 1 litro con acqua o tampone. Per le diluizioni corrispondenti, moltiplicare il peso per la molarità richiesta. Ad esempio, per 0,05 M, moltiplicare 58,44 per 0,05 o 2,92 grammi/litro.

% - Per le soluzioni %, sono invariabilmente w/v. Per una soluzione all'1% (p/v), sciogliere 1,0 grammo di NaCl fino a un volume finale di 100 mL con acqua o tampone. Moltiplicare il peso per una corrispondente variazione in % per altre concentrazioni.

200,300,400 mOsM - Gli osmoli per NaCl sono calcolati come il doppio della concentrazione molare. Quindi, una soluzione di 200 mOsm sarebbe 0,100 M NaCl. Allo stesso modo, 300 mOsM sarebbero 0,150 M e 400 mOsM sarebbero 0,200 M NaCl.

0,09 M - Sciogliere 2,65 grammi di citrato di sodio ad una concentrazione finale di 100 mL con acqua.

Citrato di sodio/formaldeide (per proteine ​​colorate con argento)

Sciogliere 5,0 grammi di citrato di sodio in 800 mL di acqua, aggiungere 5,0 mL di formalina concentrata (soluzione di formaldeide al 37%) e diluire a 1 litro con acqua.

Deossicolato di sodio (Acido desossicolico, sale sodico - MW 392,58)

0,15% (p/v) - Sciogliere 150 mg di acido desossicolico, sale sodico fino a un volume finale di 100 mL con acqua.

Ditionito di sodio (Na 2 S 2 O 6 2H 2 O - MW 242.16)

0,1 mg/mL - Sciogliere 10 mg di ditionito di sodio in 100 mL di acqua appena prima dell'uso. In alternativa, per ridurre una soluzione, è possibile aggiungere la polvere secca secondo necessità. Il ditionito di sodio deve essere conservato a -20% gradi C.

Fluoruro di sodio (NaF MW 42.0)

0,1 M - Sciogliere 4,2 grammi di NaF ad un volume finale di 1 litro con acqua.

Sodio laurilsolfato (SDS o SLS - MW 288,38)

0,1% (p/v) - Sciogliere 0,1 grammi di SDS fino a un volume finale di 100 mL con acqua o tampone.

Mescolare mescolando delicatamente, non agitare.

10% (p/v) - Sciogliere 10 grammi di SDS fino a un volume finale di 100 ml con acqua.

0,6 M - Sciogliere 2,49 grammi di acido malonico, sale sodico, fino a un volume finale di 25 mL con acqua o tampone.

Perclorato di sodio (NaClO 4 H 2 O - MW 140,47)

1 M - Sciogliere 14,01 grammi di perclorato di sodio ad un volume finale di 100 mL con acqua o tampone.

Fosfato di sodio, monobasico (NaH 2 PO 4 H 2 O - MW 137,99)

1 M - Sciogliere 14,01 grammi di perclorato di sodio ad un volume finale di 100 mL con acqua o tampone.

0,01 M - Sciogliere 1,38 grammi di fosfato di sodio monobasico fino a un volume finale di 1 litro.

Fosfato di sodio, dibasico (Na 2 HPO 4 7H 2 O - MW 268,07)

1 M - Sciogliere 268,07 grammi di fosfato di sodio dibasico fino a un volume finale di 1 litro.

0,2 M - Sciogliere 53,61 grammi di fosfato di sodio dibasico fino a un volume finale di 1 litro.

0,01 M - Sciogliere 2,68 grammi di fosfato di sodio dibasico fino a un volume finale di 1 litro.

Questi sono i tamponi più comuni utilizzati in biologia. Sono prodotti aggiungendo soluzioni equimolari di KH 2 PO 4 e Na 2 HPO 4 . Volumi uguali dei due produrranno un pH di 7,0, mentre il fosfato di sodio aumenterà il pH. Volumi aumentati di fosfato di potassio diminuiscono il pH. Il pH può essere regolato da 5,4 a 8,2. Se si desidera un pH di 7,0-8,2, iniziare con 500 ml di fosfato di sodio e aggiungere fosfato di potassio agitando e monitorando il pH con un pHmetro fino a raggiungere il pH desiderato. Se si desidera un pH di 5,4-7,0, iniziare con 500 ml di fosfato di potassio e aggiungere fosfato di sodio fino a raggiungere il pH desiderato. Tipicamente, la molarità del tampone varierà da 0,01 a 0,1 M. Utilizzare la molarità appropriata di KH 2 PO 4 e Na 2 HPO 4 . Cioè, se si desidera un tampone 0,05 M, utilizzare 0,5 M KH 2 PO 4 e 0,5 M Na 2 HPO 4 come indicato sopra.

Tampone fosfato di sodio e potassio - Fare riferimento a Tampone fosfato di sodio.

Pirofosfato di sodio (Na 4 P 2 O 7 10H 2 O - MW 446.06)

10 mM - Sciogliere 0,446 grammi di Na 4 P 2 O 7 10 H 2 O ad un volume finale di 100 mL con acqua.

Succinato di sodio (MW 270,16)

0,6 M - Sciogliere 16,2 grammi di acido succinico, sale sodico fino a un volume finale di 100 mL con acqua o tampone.

0,33 M - Sciogliere 60,12 grammi di sorbitolo ad un volume finale di 1 litro con acqua o tampone.

Tampone fosfato Sorenson - Fare riferimento al tampone fosfato di sodio.

0,2 M - pH 7,5 - Sciogliere 24,14 grammi di Na 4 P 2 O 7 e 4,08 grammi di KH 2 PO 4 in 800 mL di acqua. Diluire ad un volume finale di 1 litro.

Soluzione di sublimazione (vetrini) - Fare riferimento alla gelatina di allume di cromo.

1.0 M - Sciogliere 34,2 grammi di saccarosio ad un volume finale di 100 mL con acqua o tampone. Per altre molarità, moltiplicare il peso per la concentrazione molare richiesta. Ad esempio, per 0,25 M di saccarosio, pesare 34,2 x 0,25 o 8,55 grammi fino a un volume finale di 100 ml.

40% (p/v) - Sciogliere 40 grammi di saccarosio fino a un volume finale di 100 ml con acqua o tampone. Diluire questa soluzione per requisiti percentuali inferiori. Se si utilizza per gradienti di densità di saccarosio, il saccarosio dovrebbe avere 0,1 mL di dietilpirocarbonato, la soluzione portata a ebollizione per 3-5 minuti e raffreddata prima dell'uso. Ciò eliminerà l'RNAasi, che altrimenti sarebbe un contaminante della soluzione. Conserva tutte le soluzioni di saccarosio in frigorifero.

acido solforico (H2COSÌ4 - MW 98,08)

H . concentrato2COSÌ4 è 17,8 M o 35,6 N. 1,09 N Aggiungere lentamente 30,6 mL di acido solforico concentrato, con costante agitazione e con adeguata protezione dagli schizzi, a circa 800 mL di acqua. Raffreddare e portare il volume a 1 litro con acqua.

Acido solforoso (per la reazione di Feulgen)

Aggiungere 1,0 mL di HCl concentrato e 0,4 grammi di bisolfito di sodio a 100 mL di acqua distillata. Questa soluzione deve essere preparata fresca prima dell'uso. Non si conserva bene.

Per scopi di coltura tissutale, utilizzare un detergente non tossico progettato per il lavaggio chirurgico. per esempio. Phisohex, Betadine o equivalenti. Per la maggior parte dei tamponi di routine, l'etanolo al 70% (v/v) è sufficiente e ha il vantaggio di non lasciare residui.

TEMED (N, N, N', N'-tetrametiletilendiammina)

Catalizzatore per PAG. Utilizzare direttamente e aggiungere 10 l di TEMED per 15 ml di soluzione gel.

0,1% (p/v) - Sciogliere 0,1 grammi di blu di toluidina in 10 mL di etanolo e aggiungere acqua o tampone citrato (pH 6,8-7,2) a un volume finale di 100 mL.

Acido tricloroacetico (TCA - CCl3COOH - MW 163.4)

72% (p/v) - Sciogliere 72 grammi di TCA fino a un volume finale di 100 ml. Il TCA è igroscopico e assorbe facilmente l'acqua. I cristalli solidi diventeranno liquidi se la bottiglia di scorta viene posta in acqua calda, con un tappo allentato (punto di fusione 57-58°C. È più facile da maneggiare come liquido. Lo stoccaggio di soluzioni superiori al 30% (p/v) è non raccomandato in quanto la decomposizione è rapida, pertanto queste soluzioni devono essere preparate secondo necessità.

Esistono molte varianti della combinazione di tampone Tris-HCl di base, la maggior parte delle quali sono disponibili in commercio. Le soluzioni con EDTA sono note come tamponi TE, mentre le soluzioni con EDTA e acido acetico sono note come tamponi TAE. La terminologia varia con l'autore, con il tampone Tris utilizzato per indicare le soluzioni Tris-HCL. Sigma Chemical Co., St. Louis, offre una linea completa di tamponi commercializzati con il nome commerciale di Trizma (base e HCl). Il tampone di base è una combinazione di Tris (tris(idrossimetil)amminometano) e acido HCl. Questi sono a volte indicati come soluzioni Tris-base e Tris-HCl. I tamponi Tris non devono essere utilizzati al di sotto di un pH di 7,2 o al di sopra di un pH di 9,0. I tamponi Tris sono anche estremamente sensibili alla temperatura. Vengono fornite indicazioni per la temperatura ambiente (25 C). Il pH diminuirà di circa 0,028 unità per ogni grado di diminuzione della temperatura.

1 M - Sciogliere 121 grammi di Tris in 800 mL di acqua distillata. Regolare il pH con HCl concentrato. Diluire ad un volume finale di 1 litro. Le molarità inferiori richieste possono essere diluite da questo stock o miscelate come combinazioni di molarità inferiori di Tris e HCl. È importante misurare il pH alla temperatura e alla molarità che verranno utilizzate nell'analisi finale.

5X - Sciogliere 15,1 grammi di base tris e 72,0 grammi di glicina fino a un volume finale di 1 litro. Per l'uso, diluire 1 parte di tampone 5X con 4 parti di acqua.

0,2 % (p/v) - Sciogliere 0,2 grammi di tripan blue fino a un volume finale di 100 ml con acqua.

0,25% - 0,25% Sciogliere 0,25 grammi di tripsina grezza in PBSA fino a un volume finale di 100 mL. Sterilizzare a freddo per filtrazione. In alternativa, acquistare tripsina grezza prediluita, venduta come 1:250, anch'essa pre-sterilizzata.

Aggiungere 17,0 grammi di tripticasi peptone, 3,0 grammi di fitone peptone, 5,0 grammi di cloruro di sodio, 2,5 grammi di fosfato dipotassico e 2,5 grammi di glucosio a 1 litro di acqua. Regolare il pH a 7,3 e autoclavare.

Tween 20 o 80 (monooleato di poliossietilene sorbitano)

1% (v/v) - Aggiungere 1,0 mL di Tween a 90 mL di acqua. Mescolare e diluire fino ad un volume finale di 100 ml con acqua.

5% (p/v) - Sciogliere 5,0 grammi di acetato di uranile fino a un volume finale di 100 mL in etanolo al 50% (v/v). Conservare al buio a temperatura ambiente. Attendere almeno 24 ore affinché l'acetato di uranile si dissolva completamente. Questa soluzione si conserva per circa 3 mesi.

2,5 M - Sciogliere 15,02 grammi di urea ad un volume finale di 100 mL con acqua o tampone.

10 M - Sciogliere 60,06 grammi di urea ad un volume finale di 100 mL con acqua o tampone.

14 M - Sciogliere 84,08 grammi di urea ad un volume finale di 100 mL con acqua o tampone.

Macchia di vitalità - Fare riferimento a Trypan blue.

  • Fornire una fonte di dati in linea per i laboratori di biologia cellulare standard o per l'istruzione basata sull'indagine
  • Creare un accesso facile e veloce a molte altre risorse informatiche di biologia cellulare su Internet
  • Globalizzare l'insegnamento del laboratorio di biologia cellulare attraverso la rete informatica
  • Per individualizzare l'istruzione del laboratorio di biologia cellulare per diverse istituzioni
  • Per abbassare il costo dell'istruzione per i futuri scienziati.

Informazioni sul copyright per il manuale del laboratorio di biologia cellulare.
Questo lavoro è sostenuto dalla sovvenzione n. DUE 9451132 della National Science Foundation.
Il copyright rimane di proprietà del Dr. William H. Heidcamp.

Un laboratorio di biologia cellulare è composto da un assortimento di tecniche e procedure raccolte nel tempo dall'autore. In una certa misura la raccolta rappresenta il pregiudizio dell'autore per la selezione di argomenti ed esercizi specifici. La presente collezione non fa eccezione. Gli amici che sapevano dell'esistenza della raccolta pensavano che fosse necessaria la sua pubblicazione. La collezione originale comprendeva circa 100 pagine di dispense e ha prodotto un eccesso di 350 pagine.

Gli esercizi sono organizzati in quindici capitoli e dieci appendici che trattano argomenti ritenuti fondamentali per un apprezzamento della moderna biologia cellulare. Il materiale verrà aggiunto regolarmente. Si accettano suggerimenti ed esercizi specifici. Nel rivedere i corsi tenuti da dozzine di istruttori di biologia cellulare e guardando i curricula riassuntivi di un centinaio di altri, è evidente che c'è una grande diversità nell'insegnamento della biologia cellulare. In alcune istituzioni, la biologia cellulare è un corso introduttivo senza prerequisiti e spesso sostituisce la biologia generale. Può essere insegnato senza alcuna componente di laboratorio o con strumenti e attrezzature piuttosto semplici progettati per illustrare concetti di base. All'estremo opposto, il corso confina con il livello universitario senior fino al primo anno di laurea, con procedure sofisticate, costose e dispendiose in termini di tempo, solitamente incentrate sull'area di ricerca professionale del docente. La preponderanza dei corsi di biologia cellulare rientra tra questi estremi: sono corsi offerti a laureati in biologia con un prerequisito di biologia generale, una preferenza per un background di chimica e progettati per portare a ulteriori lavori a livello molecolare di studio (Genetica e Biologia Molecolare o Immunologia).

Gli esercizi sono a tre livelli. Gli esercizi di livello I presentano concetti fondamentali e utilizzano tecniche minime necessarie per studiare le cellule. Si ritiene che qualsiasi istituzione dovrebbe avere le strutture per completare questi esercizi. Il livello II presenta tecniche e procedure che richiedono più tempo ed energia da parte di studenti e istruttori. Il lavoro a questo livello è appropriato per una laurea in biologia che prosegue gli studi universitari e professionali. Richiede più attrezzature e forniture rispetto al Livello I. I dipartimenti seri sugli attuali studi di biologia cellulare avranno a disposizione o progettano di acquistare l'attrezzatura necessaria per svolgere attività di Livello II. Il livello III soddisfa le esigenze di lavoro avanzato e studi indipendenti sul campo. Gli esercizi presentati a questo livello sono stati eseguiti da studenti che lavorano con l'autore e quindi possono essere eseguiti presso un'istituzione universitaria. Gli esercizi di livello III hanno lo scopo di incoraggiare i progetti di ricerca degli studenti. Gli studenti saranno responsabili del lavoro oltre il laboratorio programmato. Gli esercizi di livello III combinano diverse tecniche avanzate e spesso richiedono strumentazione che potrebbe non essere prontamente disponibile nel dipartimento di biologia del college medio.

Tuttavia, non ci sono esercizi che alcune istituzioni universitarie non stiano attualmente eseguendo. La decisione di collocare un esercizio a un dato livello è unicamente quella dell'autore non tutti dividerebbero gli esercizi allo stesso modo. Pertanto, l'indicazione del livello è una guida, non un assoluto. È consentito scaricare e modificare qualsiasi documento HTML o immagine per uso didattico. Si richiede, tuttavia, di indicare la fonte di eventuali materiali utilizzati. Se intendi utilizzare gli esercizi, facci sapere quante copie farai e lo scopo previsto (per i nostri archivi). Tutte le copie devono contenere la fonte del materiale e una dichiarazione di sostegno della National Science Foundation. Il copyright rimane di proprietà del Dr. William H. Heidcamp. Se hai commenti sugli esercizi, correzioni o miglioramenti, contattaci. Se desideri aggiungere un esercizio, esamineremo l'esercizio e lo aggiungeremo all'elenco. Ti verrà assegnato l'intero credito per l'esercizio, ma devi consentire l'uso gratuito dell'esercizio attraverso la rete.-->


Funzione del citocromo P450 e ruoli farmacologici nell'infiammazione e nel cancro

Tiangang Li, Udayan Apte, in Progressi in farmacologia, 2015

3.2.5 Recettore di gravidanza X

PXR può essere attivato da un'ampia gamma di xenobiotici, endobiotici e farmaci clinici e, a sua volta, induce un numero di enzimi della famiglia CYP3A e CYP2, enzimi di coniugazione e trasportatori nel metabolismo dei farmaci (Kliewer, Goodwin, & Willson, 2002). Nella colestasi, alti livelli di acidi biliari primari e acidi biliari secondari e alcuni dei metaboliti intermedi degli acidi biliari possono attivare la PXR. Dopo l'attivazione del ligando, PXR di solito induce la trascrizione genica tramite il legame agli elementi di risposta xenobiotici nelle sue regioni promotrici o potenziatrici del gene bersaglio. Nel metabolismo degli acidi biliari di fase I, PXR induce CYP3A4 e CYP2B geni (Staudinger et al., 2001). L'idrossilazione degli acidi biliari da parte del CYP3A4 non solo disintossica gli acidi biliari ma aumenta anche la loro coniugazione e la successiva escrezione. In particolare, CYP3A4 può convertire CDCA in HCA e acido 3α,7α-diidrossi-3-osso-5β-colanoico e CA in 3-deidro-CA. Il CYP3A4 può convertire il DCA altamente tossico e cancerogeno in 3-deidro-DCA e acido 1β,3α,12α-triidrossi-5β-colanoico e LCA in 3-deidro-LCA, acido iodesossicolico e 1β-idrossi-LCA. Nel metabolismo degli acidi biliari di fase II e III, PXR induce gli enzimi di coniugazione degli acidi biliari, SULT2A1 e UGT, il trasportatore canalicolare MRP2 e il trasportatore basolaterale OATP2 (Kliewer & Willson, 2002). Questi geni bersaglio PXR sono indotti in topi trattati con LCA o sottoposti a legatura del dotto biliare, mentre queste risposte adattative sono state alterate in pxr topi knockout. PCN, un agonista del topo PXR, ha represso l'espressione dell'mRNA del CYP7A1 epatico, l'attività enzimatica e la secrezione di acidi biliari nei roditori (Mason & Boyd, 1978 Stahlberg, 1995 Staudinger et al., 2001), suggerendo che il PXR può regolare la sintesi degli acidi biliari. È stato anche dimostrato che la PXR attivata dalla rifampicina reprime l'umano CYP7A1 trascrizione genica (Bhalla, Ozalp, Fang, Xiang, & Kemper, 2004 Li & Chiang, 2005). PXR non si lega direttamente al CYP7A1 promotore genico. Invece, interagisce con e reprime l'attività di transattivazione di HNF4α che lega il CYP7A1 promotore genico. Inoltre, è stato dimostrato che l'attivazione di PXR nell'intestino induce l'espressione di FGF15 o FGF19 ed è stato identificato un elemento di risposta PXR nel promotore del FGF19 (Wang, Venkatesh, et al., 2011 Wistuba, Gnewuch, Liebisch, Schmitz, & Langmann, 2007). I topi privi di PXR erano più suscettibili all'epatotossicità causata dal trattamento con LCA o dalla legatura del dotto biliare (Staudinger et al., 2001 Stedman et al., 2005). Gli studi hanno anche dimostrato che l'attivazione farmacologica di PXR protegge dal danno epatico indotto dagli acidi biliari in modelli sperimentali di colestasi (Stedman et al., 2005). La rifampicina, l'agonista PXR umano, è stata utilizzata per ridurre il prurito associato alla colestasi nell'uomo (Hofmann, 2002). L'efficacia della rifampicina nel trattamento del prurito varia da individuo a individuo (Hofmann, 2002).


Un microrganismo anaerobio obbligato in grado di deidrossilare l'acido colico in acido desossicolico e l'acido allocolico in acido allodesossicolico è stato isolato dalle feci del coniglio. Era un membro del gruppo bacteroides (anaerobi Gram-variabili, non sporigeni). La crescita del microrganismo è stata inibita dalla neomicina, 10-20 μg/ml. L'esistenza di questo microrganismo fornisce una spiegazione soddisfacente per lo sviluppo di calcoli biliari nel coniglio nutrito con colestanolo e per la loro assenza nei conigli trattati contemporaneamente con neomicina.

Utilizziamo i cookie per fornire e migliorare il nostro servizio e personalizzare contenuti e annunci. Continuando accetti i uso dei cookie .


4. Conclusioni

In sintesi, una serie di nuovi derivati ​​DCA 210, contenenti diammina alifatica e aminoalcool, nonché porzioni morfoline in posizione C3, sono stati sintetizzati e testati per la citotossicità contro quattro linee cellulari tumorali umane, macrofagi murini e fibroblasti umani non maligni in vitro, nonché per la loro capacità di sopprimere la produzione di NO mediante macrofagi. Abbiamo dimostrato che tutti i sostituenti contenenti ammina introdotti hanno aumentato significativamente la citotossicità dei nuovi composti rispetto alla molecola madre DCA e non hanno conferito attività inibitoria contro la sintesi di NO mediata dai macrofagi. È stato dimostrato che i composti valutati mostrano una marcata selettività dell'effetto antiproliferativo per le linee cellulari tumorali enteroepatiche HuTu-80 e HepG2, che aumenta notevolmente quando i gruppi amminici terziari nelle frazioni laterali dei derivati ​​(composti 2/5 e 3/6) sono stati sostituiti da gruppi ossidrilici (composti 8 e 9). Composto 9, recante un sostituente aminopropanolo in posizione C3, è stato identificato come un composto principale, che mostra il più alto indice di selettività nella serie testata per le cellule HuTu-80 più sensibili e buoni parametri di somiglianza del farmaco. Studi meccanicistici del composto 9 nelle cellule HuTu-80 ha rivelato che questo derivato induce la morte cellulare ROS-dipendente mediante l'attivazione dell'apoptosi intrinseca caspasi-dipendente e dell'autofagia citodistruttiva. I risultati delle simulazioni di docking molecolare hanno mostrato che il VDR può essere considerato come un bersaglio intracellulare primario del composto 9. Presi insieme, i nostri risultati forniscono alcuni nuovi suggerimenti per la progettazione di nuovi agenti antitumorali basati sullo scaffold BA e una base per una migliore comprensione del meccanismo d'azione dei derivati ​​​​BA.


Impianto idraulico

Robert C. Dysko, . Wesley D. Thompson, in Pianificazione e progettazione di strutture per animali da ricerca, 2009

D Sistemi di acqua distillata/deionizzata/osmosi inversa

L'acqua purificata può essere richiesta nella procedura e negli spazi di supporto all'interno di una struttura per animali. La prima decisione deve essere la qualità dell'acqua richiesta in tutta la struttura. La qualità necessaria varierà in base agli usi specifici dell'acqua purificata.

Ci sono almeno quattro diversi standard di qualità dell'acqua in uso nel settore: il College of American Pathologists (CAP), l'American Society for Testing and Materials (ASTM), il Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI, precedentemente NCCLS) e il Farmacopea degli Stati Uniti (USP). Una volta selezionato uno standard, è necessario determinare il tipo specifico di qualità dell'acqua. Ad esempio, ASTM utilizza le designazioni Tipo I, II, III e IV per le varie purezze per l'acqua di grado reagente. Il tipo I è l'acqua di qualità più elevata utilizzata per applicazioni critiche, come l'analisi di elementi in traccia e HPLC, e il tipo IV è la qualità più bassa, utilizzata per applicazioni meno critiche come il risciacquo della vetreria.

L'acqua purificata può essere prodotta da un sistema centrale e distribuita attraverso l'edificio, o nel punto di utilizzo, o con una combinazione di questi metodi. Non è insolito avere un sistema centrale che produce acqua di Tipo IV che viene distribuita a tutti i punti di utilizzo, e quindi ogni singolo punto di utilizzo ha un'unità di lucidatura che fornisce un grado di acqua superiore (Tipo I, II o III) se richiesto.

Una varietà di diverse combinazioni di apparecchiature possono essere combinate per produrre acqua purificata per soddisfare i vari standard di qualità. Alcuni standard specificano in modo specifico quale processo può essere utilizzato per produrre l'acqua. La necessità di stoccaggio dell'acqua dipende dalle dimensioni dell'impianto e dalla quantità di acqua utilizzata. I sistemi di piccole dimensioni possono essere in grado di utilizzare filtri a cartuccia e nessun deposito. I sistemi più grandi potrebbero dover utilizzare filtri multimediali più grandi e richiedere spazio di archiviazione. Poiché attualmente è disponibile un'ampia varietà di apparecchiature relative alla purificazione dell'acqua, con una tecnologia in continuo progresso, questo capitolo affronterà un tipico sistema "medio".

Un tipico sistema di acqua purificata presenta diverse fasi di trattamento. Solitamente, l'acqua sanitaria viene inviata all'ingresso del sistema di trattamento a 27 °C e quindi fatta passare attraverso un filtro multimediale per rimuovere particolato e sostanze biologiche. La temperatura di 77 ° F è considerata la temperatura ideale per la produzione più efficace di acqua ad osmosi inversa (RO). L'acqua filtrata viene quindi fatta passare attraverso un addolcitore per rimuovere la durezza (minerali) dall'acqua e attraverso un filtro da 3 μm per catturare l'eventuale resina che potrebbe passare dal letto dell'addolcitore. Viene quindi fornito un mezzo per la rimozione del cloro, come l'iniezione di sostanze chimiche o carbone attivo, seguito da un filtro da 5 μm per catturare eventuali particelle aggiuntive. Successivamente, l'acqua entra nell'unità RO stessa, che pressurizza l'acqua e la spinge attraverso una membrana che impedisce il passaggio di eventuali impurità. Questa acqua pura viene quindi diretta a un serbatoio di accumulo, che di solito è dimensionato per contenere 1 giorno di acqua.

Dal serbatoio di stoccaggio, l'acqua viene prelevata tramite pompe e può essere fatta passare attraverso un'ulteriore lucidatura con un sistema di deionizzazione (DI) per produrre acqua di qualità superiore. La tecnologia più recente che è entrata in uso negli ultimi 10 anni utilizza l'elettrodeionizzazione, che elettrizza il processo di rigenerazione della resina di scambio. L'acqua viene quindi fatta passare attraverso una luce ultravioletta (UV) per sterilizzarla. Di solito viene fornito un filtro finale da 0,2 μm per raccogliere qualsiasi resina dal processo DI o materiale biologico degenerato dal trattamento UV. Quest'acqua viene poi distribuita attraverso un sistema di tubazioni ai punti di utilizzo.

Il sistema di tubazioni per l'acqua depurata può essere senza uscita nel punto di utilizzo terminale o essere ricircolato al serbatoio di accumulo. Un sistema senza uscita può consentire la crescita batterica all'interno delle tubazioni a causa del ristagno d'acqua. Un sistema di ricircolo mantiene l'acqua in movimento a una velocità compresa tra 3 e 5 piedi al secondo per creare un'azione abrasiva nelle tubazioni per ridurre la crescita batterica. In caso di utilizzo di un sistema a ricircolo, i punti d'uso terminali che si diramano dalla rete di ricircolo devono essere mantenuti il ​​più corti possibile per evitare ristagni locali.

Per stimare il volume di acqua purificata che il sistema deve produrre giornalmente, è possibile utilizzare un carico di 10 galloni al giorno per uscita del lavandino come cifra per l'utilizzo generale dell'acqua. Per le apparecchiature specializzate che utilizzano l'acqua purificata, la domanda deve essere esaminata in base ai requisiti specifici dell'apparecchiatura e dell'impianto. Per le portate di progetto, le uscite del lavandino dovrebbero essere stimate a 1–2 galloni al minuto (gpm) e le uscite delle apparecchiature stimate a 5 gpm, a meno che non sia richiesta una portata maggiore dall'attrezzatura specifica da servire. Il dimensionamento del tubo per il sistema dell'acqua purificata dovrebbe essere basato su una velocità media di 3-5 fps. La pressione minima di progetto alle uscite dovrebbe essere di 20 psi. Se devono essere utilizzate unità di lucidatura al punto d'uso, è necessario verificare che i requisiti di flusso e pressione di alimentazione dell'acqua per il sistema primario soddisfino i requisiti per il/i sistema/i di depurazione secondario.

Esiste un'ampia varietà di scelte per i materiali dei tubi per la distribuzione dell'acqua purificata, che devono essere valutati in base all'applicazione specifica. Oltre al costo del materiale, è necessario valutare la qualità dell'acqua, il metodo di risanamento, le pressioni e le temperature di esercizio, nonché la disponibilità del mercato e l'esperienza dell'appaltatore. I materiali del sistema di tubazioni che sono stati selezionati per la distribuzione dell'acqua purificata includono cloruro di polivinile (PVC), cloruro di polivinile clorurato (CPVC), polipropilene naturale o pigmentato (PP), fluoruro di polivinilidene (PVDF) e acciaio inossidabile di tipo 304 o 316. I tubi in PVC e CPVC sono uniti con giunti a bicchiere cementati a solvente, questi solventi possono contribuire a contaminanti estraibili e i giunti possono essere luoghi per lo sviluppo di biofilm batterico. Il PVC e il CPVC possono essere sterilizzati solo chimicamente, ma sono i meno costosi e possono essere più adatti per acqua meno pura. Il polipropilene è il materiale più utilizzato e può essere unito utilizzando giunti a bicchiere per fusione a caldo, giunti di testa a fusione di calore, giunti di testa a fusione di calore a infrarossi o giunti a fusione di calore a infrarossi senza fessure senza perline. Quest'ultimo giunto è il tipo più liscio, con conseguente superficie minima per la possibile crescita batterica. Tuttavia, il PP deve anche essere sanificato chimicamente. Il PVDF ha gli stessi metodi di giunzione del polipropilene, ma può essere igienizzato sia termicamente che chimicamente.

L'acciaio inossidabile è stato ampiamente utilizzato nell'industria di processo, principalmente per la sua capacità di essere sterilizzato a caldo e per la sua durata contro gli abusi. L'acciaio inossidabile ha una varietà di finiture superficiali interne, dalla più comune lucidatura meccanica a grana 180 fino alle lucide a specchio di 20 Ra (rugosità media) o meno. Non esiste un materiale migliore per tutte le applicazioni, ma il polipropilene e l'acciaio inossidabile sono i più popolari.

La necessità di convalida del sistema deve essere determinata il prima possibile. La documentazione di progettazione e la registrazione durante la fabbricazione devono essere incluse nel processo di costruzione. Infine, i complessi sistemi di trattamento dell'acqua purificata dovrebbero essere dotati anche di allarmi di malfunzionamento in modo che il personale possa essere avvisato di problemi con la produzione o il flusso.


I componenti della bile e gli amminoacidi influenzano la sopravvivenza del giovane appena escistato Clonorchis sinensis nel mantenimento dei media

Clonorchis sinensis prospera sul succo biliare. Gli effetti della bile e degli acidi biliari sui giovani excysted C. sinensis (CsNEJ) sono stati studiati in termini di sopravvivenza. La sopravvivenza dei CsNEJ mantenuti nella soluzione 1× Locke, nel mezzo Eagle modificato di Dulbecco, NCTC 109, Eagle, RPMI 1640 e 0,1% di glucosio era elevata, ma è scesa rapidamente in 2× Locke, 0,85% NaCl e soluzione salina tamponata con fosfato. La maggior parte degli amminoacidi nei media ha favorito la sopravvivenza di CsNEJ, tuttavia, gli acidi aspartico e glutammico e l'adenina hanno ridotto la sopravvivenza. La sopravvivenza era anche significativamente inferiore nei terreni contenenti più dello 0,1% di bile. I CsNEJ precondizionati nei mezzi biliari bassi sono sopravvissuti più a lungo nei mezzi biliari superiori. È stato riscontrato che tutti gli acidi biliari e i sali biliari coniugati favoriscono la sopravvivenza di CsNEJ, ad eccezione dell'acido litocolico (LCA) che era tossico. Il terreno NCTC 109 è risultato ottimale per il mantenimento in vitro di CsNEJ e la soluzione 1× Locke è adatta per analizzare gli effetti biologici di composti e molecole bioattivi. Sulla base di questi risultati, proponiamo che gli acidi biliari aumentino l'attività dei CsNEJ, ma l'LCA deteriori i CsNEJ.

Questa è un'anteprima del contenuto dell'abbonamento, accedi tramite il tuo istituto.


Astratto

L'epitelio intestinale costituisce una barriera innata che, in caso di lesione, subisce processi di autoriparazione noti come restituzione. Sebbene gli acidi biliari siano noti come importanti regolatori della funzione epiteliale nella salute e nella malattia, i loro effetti sui processi di guarigione delle ferite non sono ancora chiari. Qui abbiamo deciso di studiare gli effetti degli acidi biliari del colon, acido desossicolico (DCA) e acido ursodesossicolico (UDCA), sulla restituzione epiteliale. Guarigione delle ferite in T84 monostrati cellulari cresciuti su supporti trasparenti e permeabili sono stati valutati in 48 ore con o senza acidi biliari. La migrazione cellulare è stata misurata nelle camere di Boyden. L'espressione di mRNA e proteine ​​è stata misurata mediante RT-PCR e Western blotting. DCA (50-150 µM) ha inibito significativamente la chiusura della ferita nei monostrati epiteliali coltivati ​​e ha attenuato la migrazione cellulare nei saggi della camera di Boyden. DCA ha anche indotto l'accumulo nucleare del recettore farnesoide X (FXR), mentre un agonista FXR, GW4064 (10 µM), ha inibito la chiusura della ferita. Sia DCA che GW4064 hanno attenuato l'espressione dei canali CFTR Cl-, mentre l'inibizione dell'attività CFTR con CFTR-inh-172 (10 µM) o GlyH-101 (25 µM) hanno anche impedito la guarigione della ferita. I test del promotore/reporter hanno rivelato che la downregulation di CFTR indotta da FXR è mediata a livello trascrizionale. Al contrario, l'UDCA (50-150 µM) ha migliorato la guarigione delle ferite in vitro e ha prevenuto gli effetti del DCA. Infine, DCA ha inibito e UDCA ha promosso la guarigione della mucosa in un modello murino in vivo. In conclusione, questi studi suggeriscono che gli acidi biliari sono importanti regolatori della guarigione delle ferite epiteliali e sono quindi buoni bersagli per lo sviluppo di nuovi farmaci per modulare la funzione di barriera intestinale nel trattamento della malattia.

NUOVO e NOTEVOLE L'acido biliare secondario, l'acido desossicolico, inibisce la guarigione delle ferite dell'epitelio del colon, un effetto che sembra essere mediato dall'attivazione del recettore nucleare degli acidi biliari, FXR, con conseguente downregulation dell'espressione e dell'attività di CFTR. Al contrario, l'acido ursodesossicolico favorisce la guarigione delle ferite, suggerendo che potrebbe fornire un approccio alternativo per prevenire le perdite della funzione barriera che sono associate all'infiammazione della mucosa nei pazienti con IBD.


Ultimi brevetti ALLERGAN SALES, LLC:

Questa domanda è una continuazione della domanda di brevetto statunitense Ser. 15/650.556, depositato il 14 luglio 2017, che è una continuazione della domanda di brevetto statunitense Ser. 14/175.086, depositato il 7 febbraio 2014, che è una continuazione della domanda di brevetto statunitense n. 13/733.729, depositato il 3 gennaio 2013, ora brevetto statunitense n. No. 9.186.364, che è una continuazione della domanda di brevetto statunitense n. 13/323.605, depositato il 12 dicembre 2011, ora brevetto statunitense n. N. 8.367.649, che è una continuazione della domanda di brevetto statunitense n. 12/716.070, depositato il 2 marzo 2010, ora brevetto statunitense n. n. 8.101.593, che rivendica il beneficio ai sensi del 35 U.S.C. § 119(e) alla domanda di brevetto provvisorio degli Stati Uniti n. 61/274.129, che è stata convertita dalla domanda di brevetto statunitense n. N. 12/397.229, depositato il 3 marzo 2009, tutti qui incorporati per riferimento nella loro interezza.

La presente invenzione riguarda formulazioni farmaceutiche di acido in acqua in cui la formulazione viene mantenuta ad un pH tale da inibire sostanzialmente la precipitazione del sodio desossicolato.

La rapida rimozione del grasso corporeo è un ideale antico e molte sostanze sono state affermate per ottenere tali risultati, sebbene poche abbiano mostrato risultati. La "mesoterapia", o l'uso di iniettabili per la rimozione del grasso, non è ampiamente accettata tra i medici a causa di problemi di sicurezza ed efficacia, sebbene sin dagli anni '50 siano state fatte affermazioni omeopatiche e cosmetiche. La mesoterapia è stata originariamente concepita in Europa come metodo per utilizzare iniezioni cutanee contenenti una miscela di composti per il trattamento di condizioni mediche e cosmetiche locali. Sebbene la mesoterapia fosse tradizionalmente impiegata per alleviare il dolore, le sue applicazioni cosmetiche, in particolare la rimozione del grasso e della cellulite, hanno recentemente ricevuto attenzione negli Stati Uniti. Uno di questi trattamenti segnalati per la riduzione del grasso localizzato, che è stato reso popolare in Brasile e utilizza iniezioni di fosfatidilcolina, è stato erroneamente considerato sinonimo di mesoterapia. Nonostante la sua attrazione come una presunta iniezione "discioltrice del grasso", la sicurezza e l'efficacia di questi trattamenti cosmetici rimangono ambigue per la maggior parte dei pazienti e dei medici (vedi, Rotunda, AM e M. Kolodney, Chirurgia dermatologica "Mesoterapia e iniezioni di fosfatidilcolina: chiarimenti storici e Revisione”, 2006, 32: 465-480).

La letteratura pubblicata di recente riporta che l'acido desossicolico dell'acido biliare ha proprietà di rimozione del grasso quando iniettato in depositi di grasso in vivo (Vedi, WO 2005/117900 e WO 2005/112942, US2005/0261258 US2005/0267080 US2006/127468 e US2006/0154906). Il desossicolato iniettato nel tessuto adiposo ha gli effetti di: 1) degradare le cellule adipose tramite un meccanismo citolitico e 2) provocare un rassodamento della pelle. Entrambi questi effetti sono necessari per mediare le correzioni estetiche desiderate (ovvero il rimodellamento del corpo). Gli effetti del desossicolato nel grasso sono contenuti spazialmente perché il desossicolato iniettato nel grasso viene rapidamente inattivato dall'esposizione alle proteine, ad es. albumina, e poi ritorna rapidamente al contenuto intestinale. Come risultato di questo effetto di attenuazione che conferisce sicurezza clinica, le terapie di rimozione del grasso richiedono tipicamente 4-6 sessioni. Questa rimozione del grasso localizzato senza la necessità di un intervento chirurgico è utile non solo per il trattamento terapeutico relativo ai depositi di grasso localizzati patologici (ad es. dislipidemie conseguenti all'intervento medico nel trattamento dell'HIV), ma anche per la rimozione del grasso cosmetico senza il relativo rischio inerente alla chirurgia (es. liposuzione) (vedi, Rotunda et al., Dermatol. Surgery “Gli effetti detergenti del sodio desossicolato sono una caratteristica importante di una formulazione di fosfatidilcolina iniettabile utilizzata per la dissoluzione del grasso localizzato”, 2004, 30: 1001-1008 e Rotunda et al. , J. Am. Acad. Dermatol. "Lipomi trattati con iniezioni sottocutanee di desossicolato", 2005: 973-978).

Tutte le pubblicazioni e le domande di brevetto menzionate in questa specifica sono qui incorporate per riferimento nella stessa misura in cui ogni singola pubblicazione o domanda di brevetto fosse specificatamente e individualmente indicata come incorporata per riferimento.

Si è trovato che soluzioni acquose di sodio desossicolato a basse concentrazioni (cioè <5% p/v) di sodio desossicolato possono essere stabilizzate regolando il pH della soluzione. La presente invenzione riguarda una formulazione farmaceutica acquosa comprendente meno di circa il 5% p/v di sodio desossicolato in cui la formulazione è mantenuta ad un pH sufficiente per inibire sostanzialmente la precipitazione del sodio desossicolato.

Anche qui divulgati, sono metodi per inibire la precipitazione di sodio desossicolato in una soluzione acquosa comprendente meno di circa il 5% p/v di sodio desossicolato, detto metodo comprendendo il mantenimento del pH della soluzione da circa 8,0 a circa 8,5.

BREVE DESCRIZIONE DEI DISEGNI

FICHI. 1A, 1B, 1C, 1D, 1E e 1F mostrano la variabilità del pH in un periodo di due settimane di formulazioni contenenti 5, 50, 100 e 160 mg/mL (0,5, 5, 10 e 16% p/v) di sodio desossicolato a 4° C. (FIG. 1A, 1B e 1C) e 25° C. (FIG. 1D, 1E e 1F).

FICHI. 2A, 2B, 2C e 2D mostrano che la solubilità è indipendente dalla variabilità del pH da lotto a lotto. FICO. 2A è un confronto dei campioni da 5 mg (0,5% p/v) testati nelle FIGG. 1A, 1B, 1C, 1D, 1E e 1F. FICO. 2B è un confronto dei campioni da 50 mg (5% p/v) testati nelle FIGG. 1A, 1B, 1C, 1D, 1E e 1F. FICO. 2C è un confronto dei campioni da 100 mg (10% p/v) testati nelle FIGG. 1A, 1B, 1C, 1D, 1E e 1F. FICO. 2D è un confronto dei campioni da 160 mg (16% p/v) testati nelle FIGG. 1A, 1B, 1C, 1D, 1E e 1F.

FICO. 3 mostra un cromatogramma HPLC in fase inversa per una formulazione acquosa da 20 mg/mL (2% p/v) di sodio desossicolato (0,9% NaCl e 0,9% alcol benzilico in tampone fosfato 10 mM a pH 8,0) dopo essere stato incubato per 2 mesi a 4°C.

FICO. 4 mostra l'effetto della temperatura (4° C., 25° C. e 37° C.) sulla purezza di varie formulazioni di sodio desossicolato per un periodo di due mesi.

FICO. 5 mostra l'effetto dell'agitazione sulla purezza di varie formulazioni di sodio desossicolato di oltre quattro ore.

FICO. 6 mostra l'effetto dell'esposizione ai raggi UV sulla purezza di varie formulazioni di desossicolato di sodio per un periodo di 24 ore.

FICO. 7 mostra l'effetto di cinque cicli di congelamento-scongelamento sulla purezza di varie formulazioni di sodio desossicolato.

DESCRIZIONE DETTAGLIATA

Come qui utilizzati, alcuni termini hanno i seguenti significati definiti.

Tutte le designazioni numeriche, ad esempio pH, temperatura, tempo, concentrazione e peso molecolare, compresi gli intervalli, sono approssimazioni che variano (+) o (-) con incrementi di 0,1. Resta inteso, anche se non sempre esplicitamente dichiarato, che tutte le designazioni numeriche sono precedute dal termine “circa”. Il termine "circa" include anche il valore esatto "X" oltre a incrementi minori di "X" come "X+0.1" o "X-0.1". Si deve anche intendere, anche se non sempre esplicitamente dichiarato, che i reagenti qui descritti sono meramente esemplificativi e che equivalenti di tali sono noti nell'arte.

Come qui utilizzato, il termine "comprendente" intende significare che le composizioni e i metodi includono gli elementi recitati, ma non ne escludono altri. "Costituito essenzialmente da" quando utilizzato per definire composizioni e metodi, significa escludere altri elementi di qualsiasi significato essenziale per la combinazione quando utilizzato per lo scopo previsto. Pertanto, una composizione costituita essenzialmente dagli elementi come qui definiti non escluderebbe contaminanti in tracce dal metodo di isolamento e purificazione e veicoli farmaceuticamente accettabili, come soluzione salina tamponata con fosfato, conservanti e simili. "Costituito da" significa escludere più di oligoelementi di altri ingredienti e passaggi sostanziali del metodo per somministrare le composizioni della presente invenzione. Le forme di realizzazione definite da ciascuno di questi termini di transizione rientrano nell'ambito della presente invenzione.

Come usato qui, il termine "desossicolato di sodio" si riferisce al sodio (4R)-4-((3R,5R,10S,12S,13R,17R)-3,12-diidrossi-10,13-dimetilesadecaidro-1H-ciclopenta[ a]fenantren-17-il)pentanoato come mostrato di seguito. Altri stereoisomeri rientrano nell'ambito dell'invenzione.

Deossicolato di sodio o sodio (4R)-4-((3R,5R,10S,12S,13R,17R)-3,12-diidrossi-10,13-dimetilesadecaidro-1H-ciclopenta[a]fenantren-17-il)pentanoato può essere preparato secondo i metodi descritti nella pubblicazione di brevetto statunitense n. 2008/0318870A1 intitolata "Composizione, metodo e preparazione di acidi biliari sintetici" depositata il 21 febbraio 2008, che è qui integralmente incorporata per riferimento.

Come qui utilizzato, il termine "formulazione farmaceutica acquosa" si riferisce a una formulazione di sodio desossicolato in acqua adatta per la somministrazione a un paziente.

Come usato qui, il termine "tampone" si riferisce a una soluzione acquosa comprendente una miscela di un acido debole e la sua base coniugata o una base debole e il suo acido coniugato. Un tampone ha la proprietà che il pH della soluzione cambia molto poco quando viene aggiunta una piccola quantità di acido o base. Le soluzioni tampone vengono utilizzate come mezzo per mantenere il pH a un valore quasi costante in un'ampia varietà di applicazioni chimiche. Esempi di tamponi adatti includono tamponi fosfato e quelli noti in letteratura (si veda, ad esempio, Troy, D. B., ed. (2005) Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21° ed., Lippincott Williams & Wilkins).

Come usato qui, il termine "base" si riferisce a vari composti, molecole o ioni tipicamente idrosolubili che in soluzione hanno un pH maggiore di 7. Tali composti, molecole o ioni sono in grado di assorbire un protone da un acido o sono in grado di cedere ad un acido una coppia di elettroni non condivisi. Esempi di basi adatte includono carbonati e bicarbonati metallici, ad esempio carbonato di sodio, carbonato di calcio, carbonato di magnesio, carbonato di zinco, bicarbonato di sodio e simili e idrossidi metallici, ad esempio idrossido di sodio, idrossido di potassio e simili, come quelli noti in la letteratura (vedi, per esempio, Troy, DB, ed. (2005) Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21st ed., Lippincott Williams & Wilkins).

Come usato qui, il termine "carbonati metallici" si riferisce al sale metallico di CO3 2- . Ad esempio carbonato di sodio, carbonato di calcio, carbonato di magnesio, carbonato di zinco e simili.

Come usato qui, il termine "bicarbonati metallici" si riferisce al sale metallico di HCO3 − . Ad esempio, bicarbonato di sodio e simili.

Come usato qui, il termine "idrossidi metallici" si riferisce al sale metallico di -OH. Ad esempio, idrossido di sodio, idrossido di potassio e simili.

Come qui utilizzati, i termini "acqua sterile" o "acqua per preparazioni iniettabili" si riferiscono a una preparazione sterile e apirogena di acqua per preparazioni iniettabili che non contiene batteriostati, agenti antimicrobici o tampone aggiunto. In generale, la concentrazione osmolare degli additivi ammonta ad almeno 112 mOsmol/litro (due quinti della normale osmolarità del fluido extracellulare -280 mOsmol/litro).

Come usato qui, il termine "alcol benzilico" si riferisce al composto

Come qui utilizzato, il termine "precipitazione" si riferisce alla formazione di un solido in una soluzione. Come qui utilizzato, il termine "soluzione" si riferisce a una miscela sostanzialmente omogenea comprendente due o più sostanze disciolte in un solvente.

Come qui utilizzato, il termine "inibire sostanzialmente la precipitazione" significa inibire la maggior parte o tutte le precipitazioni visibili o mantenere l'omogeneità. Questo può essere fatto per un periodo di tempo desiderato.

Come usato qui, il termine "deviazione standard relativa per omogeneità" o "HE” si riferisce al valore ottenuto dividendo la deviazione standard dell'omogeneità per il valore assoluto della media. un HE meno di 10 indica un'ottima omogeneità.

formulazioni

La conoscenza della stabilità chimica e fisica della formulazione di un farmaco nei mezzi desiderati per la somministrazione è preziosa. A lungo termine, la stabilità della formulazione determinerà la durata di conservazione del prodotto commercializzato. È preferibile che l'ingrediente attivo in una formulazione farmaceutica sia alla concentrazione richiesta quando somministrato a un paziente.

I metodi attuali per la somministrazione di sodio desossicolato a un paziente includono la somministrazione di una bassa concentrazione (cioè <5% p/v) di una soluzione acquosa di sodio desossicolato, poiché è stato dimostrato che la bassa concentrazione è vantaggiosa per l'efficacia e rimozione sicura dei depositi di grasso nel corpo. Tuttavia, è stato osservato che un precipitato si forma sia a concentrazioni relativamente basse (cioè, <5% p/v) che elevate (cioè, >16% p/v) di desossicolato di sodio in mezzi acquosi. Questa precipitazione determina una durata di conservazione limitata delle soluzioni acquose di sodio desossicolato, anche a basse temperature (3-5° C.). Questa instabilità delle soluzioni acquose di sodio desossicolato può essere aggirata preparando una soluzione acquosa di sodio desossicolato ad una concentrazione da circa il 5% a circa il 16% p/v, e facendo diluire dal medico la composizione farmaceutica di sodio desossicolato appena prima di utilizzo. Sebbene questo metodo di diluizione sia efficace per consentire sia la stabilità di conservazione che il dosaggio efficace per il paziente, non è l'ideale come metodo per l'uso di routine.

Si è trovato che soluzioni acquose di sodio desossicolato a basse concentrazioni (cioè <5% p/v) di sodio desossicolato possono essere stabilizzate regolando il pH della soluzione. La presente domanda è diretta ad una formulazione farmaceutica acquosa comprendente meno di circa 5% p/v di sodio desossicolato in cui la formulazione è mantenuta ad un pH sufficiente per inibire sostanzialmente la precipitazione del sodio desossicolato. In alcune forme di realizzazione, la formulazione farmaceutica, comprendente meno del 5% circa p/v di sodio desossicolato in acqua o, in alternativa, meno del 4,5% circa, o in alternativa, meno del 4% circa, o in alternativa, meno del 3,5% circa, o in alternativa, meno di circa il 3%, o in alternativa, meno di circa il 2,5%, o in alternativa, meno di circa il 2%, o in alternativa, meno di circa l'1,5%, o in alternativa, meno di circa l'1%, o in alternativa, meno di circa 0,75%, o in alternativa, meno di circa 0,5%, o in alternativa, meno di circa 0,1% p/v di sodio desossicolato in acqua.

Deossicolato di sodio o sodio (4R)-4-((3R,5R,10S,12S,13R,17R)-3,12-diidrossi-10,13-dimetilesadecaidro-1H-ciclopenta[a]fenantren-17-il)pentanoato può essere preparato secondo i metodi descritti nella pubblicazione di brevetto statunitense n. 2008/0318870A1 intitolata "Composizione, metodo e preparazione di acidi biliari sintetici" depositata il 21 febbraio 2008, che è qui integralmente incorporata per riferimento.

In una forma di realizzazione, le formulazioni farmaceutiche qui descritte sono adatte per l'iniezione in un essere umano. Il metodo di iniezione può essere qualsiasi tipo di iniezione, come l'iniezione sottocutanea, nonché altre forme di iniezione. Pertanto, in alcune forme di realizzazione, la formulazione acquosa è sterile. La formulazione acquosa può essere preparata utilizzando acqua sterile o acqua per preparazioni iniettabili (WFI).

In un aspetto della presente invenzione, la precipitazione del sodio desossicolato è sostanzialmente inibita per un periodo di almeno circa sei mesi. Sotto un altro aspetto, la precipitazione del sodio desossicolato è sostanzialmente inibita per un periodo di almeno circa un anno. In ancora un altro aspetto, la precipitazione del desossicolato di sodio è sostanzialmente inibita per un periodo di almeno circa due anni.

È contemplato che quando conservata a varie temperature, per esempio a temperature ambiente o fredde, la formulazione può avere una durata di conservazione aumentata. In alcune forme di realizzazione, la formulazione viene conservata a una temperatura da circa 17°C a circa 27°C. In alcune forme di realizzazione, la temperatura della formulazione viene aumentata a una temperatura da circa 25°C a circa 37°C. In altre forme di realizzazione, la formulazione viene conservata a una temperatura da circa 2°C a circa 8°C.

In alcune forme di realizzazione, il pH della formulazione varia da circa 8,0 a circa 8,5. In una forma di realizzazione, il pH della formulazione è circa 8,0 o, in alternativa, circa 8,1 o, in alternativa, circa 8,2 o, in alternativa, circa 8,3 o, in alternativa, circa 8,4 o, in alternativa, circa 8,5.

In una forma di realizzazione, il pH è stabilito mediante l'uso di una base. È contemplato che qualsiasi base possa essere utilizzata per aumentare il pH della formulazione purché non reagisca con il sodio desossicolato e non causi danni al paziente. In alcune forme di realizzazione, la base è scelta dal gruppo costituito da carbonati metallici, bicarbonati metallici, idrossidi metallici o una loro miscela. Esempi di basi includono, ma non sono limitati a, una base scelta dal gruppo costituito da carbonato di sodio, carbonato di calcio, carbonato di magnesio, carbonato di zinco, bicarbonato di sodio, idrossido di sodio e idrossido di potassio o una loro miscela. In una forma di realizzazione, la base è idrossido di sodio.

In alcuni casi, il pH della formulazione può essere mantenuto con l'uso di un tampone. Vari tamponi sono noti nell'arte ed è contemplato che qualsiasi tampone avente capacità tampone al pH desiderato possa essere usato nelle formulazioni qui divulgate. In una forma di realizzazione, il tampone è un tampone fosfato. La quantità di fosfato nella formulazione può essere determinata per fornire un pH e una concentrazione di sale desiderati. In una forma di realizzazione, la formulazione comprende circa 10 mM di fosfato.

In alcune forme di realizzazione, la formulazione comprende almeno un eccipiente per favorire l'ottenimento di una formulazione con proprietà desiderate, come maggiore solubilità, conservabilità o per fornire una soluzione isotonica. Tali eccipienti sono noti nell'arte. In una forma di realizzazione, la formulazione comprende circa l'1% di cloruro di sodio. In un'altra forma di realizzazione, la formulazione comprende circa l'1% di alcol benzilico. In alcune forme di realizzazione, la formulazione comprende circa l'1% di alcol benzilico e circa l'1% di cloruro di sodio. In alcune forme di realizzazione, la formulazione comprende circa lo 0,9% di alcol benzilico e circa lo 0,9% di cloruro di sodio.

Le formulazioni qui divulgate comprendono meno del 5% circa p/v di sodio desossicolato in acqua mantenuta ad un pH sufficiente per inibire sostanzialmente la precipitazione del sodio desossicolato. La quantità di precipitazione o omogeneità della formulazione può essere misurata utilizzando vari metodi. Ad esempio, può essere misurato quantitativamente utilizzando la diffusione della luce illuminando la formulazione con uno spettrofotometro. Oppure, in alternativa, l'omogeneità può essere misurata qualitativamente osservando con l'occhio la chiarezza visiva della soluzione. In alcune forme di realizzazione, la formulazione ha una deviazione standard relativa per l'omogeneità inferiore a circa il 5%. In alternativa, la formulazione ha una deviazione standard relativa per l'omogeneità inferiore a circa il 4%, o in alternativa, circa il 3%, o in alternativa, circa il 2%, o in alternativa, circa l'1%.

È anche contemplato l'uso di profarmaci di sodio desossicolato nelle formulazioni qui descritte. Un profarmaco è un composto attivo o inattivo che viene modificato chimicamente attraverso un'azione fisiologica in vivo, come idrolisi, metabolismo e simili, in un composto delle forme di realizzazione dopo la somministrazione del profarmaco a un paziente. Ad esempio, si può preparare un estere del presente acido desossicolico in uno o entrambi i gruppi ossidrilici su di esso o di suoi derivati ​​adatti, in modo che il rilascio dell'acido desossicolico o dei suoi derivati ​​sia innescato dalla rottura della membrana cellulare, e rilascio di esterasi. Con il rilascio dell'esterasi, il gruppo protettivo estere viene scisso in modo che la forma attiva dell'acido desossicolico o suoi derivati ​​sia presente nella posizione desiderata in situ. Per una discussione generale sui profarmaci che coinvolgono gli esteri, vedere Svensson e Tunek Drug Metabolism Review 165 (1988) e Bundgaard Design of Prodrugs, Elsevier (1985).

In alcune forme di realizzazione, le soluzioni qui non includono lipidi, fosfolipidi o fosfatidilcolina. In alcune forme di realizzazione, le soluzioni qui includono fino al 5% p/p, p/v o v/v lipidi, specificamente fosfolipidi, o più specificamente fosfatidilcolina.

In alcune forme di realizzazione, la formulazione farmaceutica acquosa dell'invenzione può comprendere inoltre un secondo agente terapeutico selezionato dal gruppo costituito da: agenti antimicrobici, vasocostrittori, agenti antitrombotici, agenti anticoagulanti, depressori della schiuma, agenti antinfiammatori , analgesici, agenti di dispersione, agenti antidispersione, stimolatori della penetrazione, steroidi, tranquillanti, miorilassanti e agenti antidiarroici. In alcune forme di realizzazione, una soluzione è in un contenitore che contiene fino a 500 mL di soluzione. Tale contenitore può essere una siringa o un contenitore caricabile con siringa.

In alcune forme di realizzazione, le formulazioni comprendono inoltre una molecola nota per provocare la morte del grasso mediante un meccanismo ortogonale. Tali molecole includono antagonisti del neuropeptide Y (NPY) inclusi, ma non limitati a, antagonisti del recettore NPY, come BIBP-3226 (Amgen), MO-3304 (Boehringer Ingleheim), BMS-192548 e AR-H040922 (Bristol-Myers Squibb) , LY-357897 (Eli Lilly), 1229U91 e GW4380145 (GlaxoSmithKline), JNJ-5207787 (Johnson e Johnson), Lu-AA-44608 (Lundbeck), MK-0557 (Merck NPY), NGD-95-1 (Neurogeno) , NLX-E201 (Neurologix), CGP-71683 (Novartis), PD-160170 (Pfizer), SR-120819A, BIIE0246 e SA0204 (Sanofi Aventis), S-2367 (Shiongli), derivati ​​diidropiridinici e diidropiridinici che sono NPY antagonisti del recettore, composti biciclici che sono antagonisti del recettore NPY, antagonisti del recettore carbazolo NPY e composti triciclici che sono antagonisti del recettore NPY (Vedi, ad esempio, WO 2006/133160 e US Pat. No. 6.313.128). Sono anche contemplati peptidi pro-apoptotici selettivi per i grassi come il peptide CKGGRAKDC che ospita il sistema vascolare del grasso bianco (Vedi, Kolonin M. G. et al., Nat. Med., 2004, 10(6): 625-32).

Un altro aspetto dell'invenzione riguarda la miscelazione di acidi biliari adipo-ablativi, come l'acido desossicolico (DCA) con agenti che uccidono le cellule adipose. In un aspetto, questa invenzione contempla un mezzo per potenziare gli effetti estetici delle iniezioni di desossicolato mescolando nell'iniettato di desossicolato una molecola che provoca la morte del grasso mediante un meccanismo ortogonale. Esempi di tali molecole candidate includono, ma non sono limitati a, antagonisti del neuropeptide Y (NPY) e peptidi pro-apoptotici selettivi dei grassi. Poiché possono essere necessari sia l'uccisione delle cellule adipose che il rassodamento della pelle per mediare gli effetti desiderati, gli effetti di un agente con capacità di eliminazione dei grassi e potenti effetti di rassodamento della pelle (come il desossicolato) possono essere potenziati mediante l'aggiunta di una molecola con un potente potere di uccisione delle cellule adipose effetti. Inoltre, le molecole che richiedono l'accesso al sistema vascolare per uccidere (come alcuni peptidi pro-apoptotici che si legano alle proteine ​​espresse sul lato luminale dei capillari) possono accedere a queste proteine ​​perché il desossicolato può causare perdite vascolari. Pertanto, tali agenti possono essere sinergici con il desossicolato, creando potenzialmente un mezzo più potente per mediare il rimodellamento corporeo in meno sessioni terapeutiche.

Esempi di antagonisti NPY includono, ma non sono limitati a, antagonisti del recettore NPY, come BIBP-3226 (Amgen), BIBO-3304 (Boehringer Ingleheim), BMS-192548 e AR-H040922 (Bristol-Myers Squibb), LY-357897 (Eli Lilly), 1229U91 e GW4380145 (GlaxoSmithKline), JNJ-5207787 (Johnson & Johnson), Lu-AA-44608 (Lundbeck), MK-0557 (Merck NPY), NGD-95-1 (Neurgogen), NLX-E201 (Neurologix), CGP-71683 (Novartis), PD-160170 (Pfizer), SR-120819A, BIIE0246 e SA0204 (Sanofi Aventis), S-2367 (Shiongli), derivati ​​diidropiridinici e diidropiridinici antagonisti del recettore NPY, biciclici composti che sono antagonisti del recettore NPY, antagonisti del recettore carbazolo NPY e composti triciclici che sono antagonisti del recettore NPY. Vedere, ad esempio, WO 2006/133160 e il brevetto U.S. 6.313.128 (incorporato nella presente per riferimento nella sua interezza comprese le figure).

I peptidi pro-apoptotici selettivi dei grassi esemplificativi includono, ma non sono limitati a, il peptide CKGGRAKDC che ospita il sistema vascolare del grasso bianco. Cfr. Kolonin M. G. et al., Nat. Med. 10 giugno (6):625-32 (2004).

Deossicolato di sodio o sodio (4R)-4-((3R,5R,10S,12S,13R,17R)-3,12-diidrossi-10,13-dimetilesadecaidro-1H-ciclopenta[a]fenantren-17-il)pentanoato può essere preparato secondo i metodi descritti nella pubblicazione di brevetto statunitense n. 2008/0318870A1 intitolata "Composizione, metodo e preparazione di acidi biliari sintetici" depositata il 21 febbraio 2008, che è qui integralmente incorporata per riferimento. Si comprenderà che quando vengono fornite condizioni di processo tipiche o preferite (vale a dire, temperature di reazione, tempi, rapporti molari di reagenti, solventi, pressioni, ecc.), possono essere utilizzate anche altre condizioni di processo se non diversamente indicato. Le condizioni di reazione ottimali possono variare con i particolari reagenti o solventi usati, ma tali condizioni possono essere determinate da un esperto del ramo mediante procedure di ottimizzazione di routine.

Viene qui descritto un metodo per inibire la precipitazione di sodio desossicolato in una soluzione acquosa comprendente meno del 5% circa p/v di sodio desossicolato, detto metodo comprendendo il mantenimento del pH della soluzione da almeno circa 8,0 a circa 8,5.

In un aspetto della presente invenzione, i metodi qui descritti inibiscono sostanzialmente la precipitazione del sodio desossicolato in soluzione per un periodo di almeno circa sei mesi. In un altro aspetto, la precipitazione del desossicolato di sodio è sostanzialmente inibita per un periodo di almeno circa un anno. In ancora un altro aspetto, la precipitazione del desossicolato di sodio è sostanzialmente inibita per un periodo di almeno circa due anni.

Si è trovato che il pH della soluzione può inibire la precipitazione del sodio desossicolato a concentrazioni inferiori a circa il 5% p/v in acqua consentendo di mantenere il sodio desossicolato in soluzione. In una forma di realizzazione, il pH è stabilito mediante l'uso di una base. È contemplato che qualsiasi base possa essere utilizzata per aumentare il pH della formulazione purché non reagisca con il sodio desossicolato. In alcune forme di realizzazione, la base è scelta dal gruppo costituito da carbonati metallici, bicarbonati metallici e idrossidi metallici, o una loro miscela. Esempi di basi includono, ma non sono limitati a, una base scelta dal gruppo costituito da carbonato di sodio, carbonato di calcio, carbonato di magnesio, carbonato di zinco, bicarbonato di sodio, idrossido di sodio e idrossido di potassio o una loro miscela. In una forma di realizzazione, la base è idrossido di sodio.

In alcune forme di realizzazione, il pH varia da circa 8,0 a circa 8,5. In una forma di realizzazione, il pH della formulazione è circa 8,0 o, in alternativa, circa 8,1 o, in alternativa, circa 8,2 o, in alternativa, circa 8,3 o, in alternativa, circa 8,4 o, in alternativa, circa 8,5. In una forma di realizzazione, il pH della soluzione acquosa è circa 8,3.

In alcuni casi, potrebbe essere necessario mantenere il pH della formulazione con l'uso di un tampone. Vari tamponi sono noti nell'arte ed è contemplato che qualsiasi tampone avente capacità tampone al pH desiderato possa essere usato nelle formulazioni qui divulgate. In una forma di realizzazione, il tampone è un tampone fosfato. La quantità di fosfato richiesta per fornire un pH e una concentrazione di sale desiderati può essere calcolata usando metodi ben noti nell'arte. In una forma di realizzazione, la formulazione comprende circa 10 mM di fosfato.

In una forma di realizzazione, i metodi qui descritti forniscono formulazioni che sono adatte per l'iniezione in un essere umano. Il metodo di iniezione può essere qualsiasi tipo di iniezione, come l'iniezione sottocutanea, nonché altre forme di iniezione. Pertanto, in alcune forme di realizzazione, la soluzione acquosa comprende acqua sterile o acqua per preparazioni iniettabili (WFI).

In un aspetto, può essere che uno o più eccipienti vengano utilizzati per mantenere la solubilità o aumentare la conservabilità del sodio desossicolato presente nella formulazione. In una forma di realizzazione, il metodo comprende l'aggiunta di circa 1% di alcol benzilico. In alcune forme di realizzazione, la formulazione comprende anche almeno un eccipiente per favorire l'ottenimento di una soluzione isotonica. Tali eccipienti sono noti nell'arte. In una forma di realizzazione, il metodo comprende l'aggiunta di circa 1% di cloruro di sodio. In alcune forme di realizzazione, il metodo comprende l'aggiunta sia dell'1% di alcol benzilico che dell'1% di cloruro di sodio. In alcune forme di realizzazione, il metodo comprende l'aggiunta sia di alcol benzilico allo 0,9% che di cloruro di sodio allo 0,9%. Usando i metodi qui descritti, una soluzione acquosa comprendente meno di circa 5% p/v di sodio desossicolato viene mantenuta ad un pH sufficiente per inibire sostanzialmente la precipitazione del sodio desossicolato. La quantità di precipitazione o omogeneità della formulazione può essere misurata utilizzando vari metodi. Ad esempio, può essere misurato quantitativamente misurando la diffusione della luce tramite l'illuminazione di uno spettrofotometro. O in alternativa, l'omogeneità può essere misurata qualitativamente semplicemente osservando con l'occhio la chiarezza visiva della soluzione. In alcune forme di realizzazione, il metodo fornisce una formulazione farmaceutica avente una deviazione standard relativa per omogeneità inferiore a circa il 5%. In alternativa, la deviazione standard relativa per l'omogeneità è inferiore a circa il 4%, o in alternativa, circa il 3%, o in alternativa, circa il 2%, o in alternativa, circa l'1%.

La temperatura di conservazione può aiutare a mantenere la solubilità del sodio desossicolato della formulazione. In alcune forme di realizzazione, la temperatura di conservazione va da circa 17°C a circa 27°C. In alcune forme di realizzazione, la temperatura di conservazione è da circa 25°C a circa 37°C. In altre forme di realizzazione, la temperatura di conservazione va da circa 2 ° C. a circa 8° C.

È contemplato che la concentrazione di sodio desossicolato possa variare da circa 0,05% p/v a circa 5% p/v senza effettuare la solubilità nella formulazione. In alcune forme di realizzazione, la formulazione comprende una concentrazione di sodio desossicolato di circa 0,05% p/v. In alternativa, la formulazione comprende una concentrazione di sodio desossicolato di circa lo 0,07% p/v, o in alternativa, circa lo 0,1% p/v, o in alternativa, circa lo 0,3% p/v, o in alternativa, circa lo 0,5% p/v, o in alternativa, circa 0,7% p/v, o in alternativa, circa 1% p/v, o in alternativa, circa 2% p/v, o in alternativa, circa 3% p/v, o in alternativa, circa 4% p/v, o in alternativa, circa 5% p/v.

    • UN500= Assorbanza a 500 Nanometri
    • cc=centimetro cubo
    • Cm=Centimetro
    • F/T=Congela/Scongela
    • HPLC=cromatografia liquida ad alte prestazioni
    • h.=Ora
    • mg=milligrammo
    • ml=millilitro
    • mm=millimetro
    • mM=millimolare
    • nm=Nanometro
    • t=Tempo
    • UV=Ultravioletto
    • v/v=Volume/Volume
    • w/v=Peso/Volume (g/mL)
    • w/w=Peso/Peso
    • WFI=Acqua per iniezione

    L'invenzione è ulteriormente intesa con riferimento ai seguenti esempi, che si intendono puramente esemplificativi dell'invenzione. La presente invenzione non è limitata nell'ambito delle forme di realizzazione esemplificate, che sono intese solo come illustrazioni di singoli aspetti dell'invenzione. Eventuali metodi funzionalmente equivalenti rientrano nell'ambito dell'invenzione. Varie modifiche dell'invenzione oltre a quelle qui descritte risulteranno evidenti agli esperti del ramo dalla precedente descrizione. Sebbene diverse forme di realizzazione dell'invenzione siano descritte qui in dettaglio, gli esperti del ramo comprenderanno che possono essere apportate variazioni ad esse senza allontanarsi dallo spirito dell'invenzione o dall'ambito delle rivendicazioni allegate. Tali modifiche rientrano nell'ambito delle rivendicazioni allegate.

    Esempio 1 Cambiamenti nel pH e osservazioni visive

    Questo esempio dimostra che formulazioni acquose contenenti meno del 5% p/v di sodio desossicolato forma un precipitato a varie temperature che non può essere riportato in soluzione. La solubilità era migliore nelle formulazioni acquose contenenti il ​​5% p/v.

    La stabilità di tre lotti di sodio desossicolato disciolto in alcool benzilico allo 0,9% e acqua per preparazioni iniettabili (WFI) è stata esaminata per le variazioni del pH e per osservazioni visive, come la formazione di precipitato. Ciascun lotto è stato formulato a quattro concentrazioni: 5, 50, 100 e 160 mg/mL (0,5, 5, 10 e 16% p/v, rispettivamente) sciolti in alcol benzilico 0,9% e WFI. La tabella 1 fornisce un riepilogo delle variabili testate in questo esempio.

    Le soluzioni sono state preparate come segue. Due campioni per ogni condizione sono stati riempiti a 2.0 mL in 3 c.c. sterili. fiale di vetro (West Pharma P/N 68000316) e tappate con tappi per siero sterili da 13 mm (West Pharma P/N 19560001). Questi campioni sono stati analizzati in duplicato ad ogni istante per verificare eventuali variazioni di pH e osservazioni visive, durante la conservazione a 2-8° C. e 25° C. per due settimane. La tabella 2 riassume le condizioni e i momenti in cui i campioni sono stati analizzati durante lo studio.

    Come si vede nelle Tabelle 3 e 4, a 5 mg/mL (0,5% p/v), il particolato fine è stato osservato generalmente in tutti i lotti e sia a 4°C che a 25°C, sebbene il Campione 1 a 4°C. non è precipitato. A 50 mg/mL (5% p/v), tutti i campioni e le condizioni erano chiari. A 100 mg/mL (10% p/v), si è verificato un effetto della temperatura poiché tutti i lotti a 4°C sono precipitati mentre i lotti a 25°C sono rimasti limpidi. A 160 mg/mL (16% p/v), si è verificato un effetto della temperatura poiché tutti i lotti a 4°C sono precipitati mentre i lotti a 25°C sono rimasti limpidi. La precipitazione osservata a 160 mg/mL (16% p/v) era più grave e rapida di 100 mg/mL, tuttavia, il prodotto precipitato a queste due concentrazioni poteva essere risolubilizzato dopo il riscaldamento a temperatura ambiente e il vortex. Il materiale precipitato a 5 mg/mL (0,5% p/v) non può essere riportato in soluzione. Questi dati sono mostrati graficamente nelle FIGG. da 1A a 1F.

    I profili di pH sia per 4°C che per 25°C erano sovrapposti, quindi sembra che la temperatura non abbia avuto un impatto a concentrazioni inferiori a 50 mg/mL (5% p/v). Sembra invece esserci un pH di solubilità per formulazioni inferiori a 50 mg/mL (5% p/v). A 100 e 160 mg/mL, i campioni a 4° C. avevano un pH più alto rispetto ai campioni a 25° C. Tuttavia, con l'aumento della concentrazione, la temperatura sembra diventare più importante del pH e la formulazione è sempre più sensibile alla temperatura.

    La tabella 5 mostra che la solubilità del sodio desossicolato è indipendente dalla variabilità del pH da lotto a lotto. In generale, non c'era alcuna differenza nella stabilità fisica tra i lotti in condizioni simili.

    Sono stati identificati tre fattori che contribuiscono alla solubilità. In nessun ordine particolare questi sono concentrazione, pH e temperatura. È stato scoperto che la variabilità da lotto a lotto del pH non tiene conto di una solubilità migliore o più scarsa. Nel complesso, 50 mg/mL sembra essere la condizione più robusta, in cui tutti i lotti sembrano essere al di sopra del pH di "solubilità" e in cui la temperatura non ha alcun impatto entro il periodo di due settimane di questo studio. I risultati suggeriscono che la concentrazione, il pH e la temperatura di conservazione influiscono sulla stabilità del sodio desossicolato. I campioni a 50 mg/mL hanno mostrato la migliore stabilità a 4° C. e 25° C. per due settimane.

    Esempio 2 Studio di stabilità

    Questo esempio dimostra che formulazioni acquose con meno del 5% p/v di sodio desossicolato a un pH compreso tra 8,0 e 8,5 hanno mostrato una solubilità molto buona. Questo esempio dimostra anche che il sodio desossicolato non mostra degradazione in formulazioni acquose aventi meno del 5% p/v di sodio desossicolato durante la conservazione per otto settimane a 4° C., 25° C. e 37° C. Un certo numero di formulazioni sono state sottoposte a agitazione, esposizione ai raggi UV e cicli di gelo-disgelo e non ha mostrato alcun degrado o precipitazione quando esposto a tali sollecitazioni.

    È stato condotto uno studio di stabilità di due mesi del sodio desossicolato in diverse formulazioni. Mediante HPLC in fase inversa, il sodio desossicolato non ha mostrato alcuna degradazione in tutte le formulazioni a tutte le temperature. Tuttavia, la solubilità era migliore nelle formulazioni contenenti fosfato 10 mM, NaCl allo 0,9%, alcool benzilico allo 0,9% a un pH di 8,0 o 8,5. Anche temperature di conservazione di 25° C. e 37° C. hanno favorito la solubilità. Tutte le formulazioni scelte per l'agitazione, l'esposizione ai raggi UV e il congelamento-scongelamento non hanno mostrato degradazione o precipitazione quando esposte a tali sollecitazioni.

    La Tabella 6 fornisce un elenco di sostanze chimiche utilizzate nella preparazione delle formulazioni qui divulgate.

    Studi di stabilità

    La stabilità delle formulazioni di sodio desossicolato è stata esaminata alle condizioni riassunte nella Tabella 7. È stato utilizzato HPLC in fase inversa insieme a osservazioni visive che sono state condotte in ogni momento per monitorare eventuali precipitazioni o intorbidamenti. Le formulazioni testate per il vortice, l'esposizione ai raggi UV e il congelamento-scongelamento sono state scelte tra le formulazioni che hanno ottenuto i risultati migliori nello studio della temperatura. I principali problemi di stabilità del sodio desossicolato osservati durante questo studio sono stati la solubilità e la deriva del pH.

    io. Effetto della temperatura sulla stabilità

    Le formulazioni sono state incubate a 4°C, 25°C e 37°C e analizzate per a) prodotti di degradazione, b) stabilità del pH ec) chiarezza della formulazione.

    Formulazioni Testate

    Fatta eccezione per le formulazioni costituite solo da acqua, il sodio desossicolato è stato sciolto in tampone che è stato titolato a un pH di 6. Ogni formulazione, eccetto le due costituite solo da acqua, è stata quindi titolata al suo pH target con NaOH. Tutte le formulazioni sono state filtrate in modo sterile e riempite fino a 1,5 mL in fiale di vetro sterili da 2 cc. Le fiale riempite sono state quindi autoclavate. Le formulazioni 3A e 3B erano torbide prima del riempimento.

    HPLC in fase inversa è stato utilizzato per visualizzare i prodotti di degradazione. Un cromatogramma campione della formulazione 4A mostra il picco principale rispetto ai prodotti di degradazione (FIG. 3). FICO. 4 mostra il picco principale rispetto ai prodotti di degradazione (cioè Purezza) per tutte le formulazioni alle temperature di incubazione di 4° C., 25° C. e 37° C. FIG. 4 mostra la purezza a t=0 e 2 mesi. I risultati suggeriscono che non si è verificata alcuna degradazione chimica in nessuna delle formulazioni della Tabella 8.

    La tabella 9 mostra il pH delle formulazioni prima del riempimento ea t=0. In generale, il pH si è spostato verso 8 ed è rimasto costante durante lo studio. Ciò suggerisce che il sodio desossicolato ha una certa capacità tampone.

    La chiarezza di ciascuna formulazione è stata determinata mediante due metodi. Un metodo era l'osservazione visiva, in cui la fiala veniva esposta a una luce intensa e la presenza di particelle veniva determinata da ciò che l'occhio poteva vedere. Una serie di flaconi riempiti con i tamponi di formulazione e incubati alle tre temperature in cui sono stati utilizzati come standard di riferimento. L'altro metodo utilizzava la diffusione della luce illuminando i campioni su una lunghezza del percorso di 1 cm con una luce di 500 nm in uno spettrofotometro.

    La presenza di precipitati visibili in alcune formulazioni è aumentata nel tempo, in particolare a 4°C. Le formulazioni contenenti sorbitolo al pH più basso hanno prodotto la maggior parte delle precipitazioni. Le formulazioni che si sono comportate meglio contenevano fosfato 10 mM, NaCl 0,9%, alcool benzilico 0,9% a pH 8,0 o 8,5.

    Le tabelle 10, 11, 12 e 13 mostrano i risultati di chiarezza. La colonna "Visual Clarity" ha un sistema di classificazione come segue: 0=chiaro, nessuna particella 1=trasparente, poche particelle 2=trasparente, molte particelle 3=trasparente, molte particelle grandi, 4=leggermente nuvoloso 5=molto nuvoloso.

    ii. Effetti dell'agitazione, dell'esposizione ai raggi UV e del gelo-disgelo sulla stabilità

    Sulla base dei risultati dello studio della temperatura, sono state scelte le seguenti formulazioni nella Tabella 14 per testare gli effetti dell'agitazione, dell'esposizione ai raggi UV e del congelamento-scongelamento sulla stabilità.

    HPLC in fase inversa è stato utilizzato per visualizzare i prodotti di degradazione. FICHI. 5, 6 e 7 mostrano il picco principale rispetto ai prodotti di degradazione (cioè Purezza) per le formulazioni in Tabella 14 sotto stress di agitazione, esposizione ai raggi UV e cinque cicli di congelamento-scongelamento. I risultati suggeriscono che non si è verificata alcuna degradazione chimica a causa di uno qualsiasi degli stress.

    La tabella 15 mostra il pH delle formulazioni prima del riempimento diverso dal pH dopo l'apertura delle fiale.

    La chiarezza di ciascuna formulazione è stata determinata mediante due metodi. Un metodo era l'osservazione visiva, in cui la fiala veniva esposta a una luce intensa e la presenza di particelle veniva determinata da ciò che l'occhio poteva vedere. Una serie di flaconi riempiti con i tamponi di formulazione e incubati alle tre temperature in cui sono stati utilizzati come standard di riferimento. L'altro metodo utilizzava la diffusione della luce illuminando i campioni su una lunghezza del percorso di 1 cm con una luce di 500 nm in uno spettrofotometro.

    L'agitazione, l'esposizione ai raggi UV e i cicli di gelo-disgelo non sembrano indurre precipitazioni.

    Le tabelle 16, 17 e 18 mostrano i risultati di chiarezza. La colonna "Visual Clarity" ha un sistema di classificazione come segue: 0=chiaro, nessuna particella 1=trasparente, poche particelle 2=trasparente, molte particelle 3=trasparente, molte particelle grandi, 4=leggermente nuvoloso 5=molto nuvoloso.

    Dopo aver esaminato il profilo di stabilità del sodio desossicolato in diciassette formulazioni uniche, è stato determinato che le formulazioni contenenti fosfato 10 mM, NaCl 0,9% e alcool benzilico 0,9% a pH 8,0 o 8,5 prevenivano al meglio la precipitazione visibile oltre a massimizzare la solubilità. Mediante HPLC in fase inversa, il desossicolato di sodio non mostra degradazione in tutte le formulazioni a tutte le temperature, durante la conservazione per otto settimane a 4° C., 25° C. e 37° C. Per quanto riguarda la chiarezza visiva delle formulazioni, temperature di conservazione di 25° C. e 37° C. effettivamente hanno migliorato la solubilità del sodio desossicolato rispetto a 4° C.

    Tutte le formulazioni scelte per l'agitazione, l'esposizione ai raggi UV e il congelamento-scongelamento non hanno mostrato degradazione o precipitazione quando esposte a tali sollecitazioni. Al completamento dello studio sulla stabilità allo stoccaggio di otto settimane, le formulazioni selezionate sono state sottoposte a queste condizioni di stress acuto. Questi esperimenti aiutano a determinare la stabilità del sodio desossicolato durante lo stress delle comuni procedure di produzione e spedizione. I dati ottenuti da questi studi di stress acuto confermano la stabilità del sodio desossicolato in formulazioni contenenti 10 mM fosfato, 0,9% NaCl e 0,9% alcol benzilico a pH 8,0 o 8,5, con concentrazione di sodio desossicolato di 5, 10 e 20 mg/mL.


    SOVVENZIONI

    Fornito da una borsa di studio Methusalem da KU Leuven a J. Tack e dalla Research Foundation Flanders (Fonds Wetenschappelijk Onderzoek Vlaanderen, FWO) attraverso borse di dottorato (a H. Vanheel e T. Vanuytsel) e post-dottorato (R. Farré).

    Il finanziamento è stato fornito anche dal Fondo de Investigación Sanitaria e CIBERehd, Instituto Carlos III, Subdirection General de Investigación Sanitaria, Ministerio de Economía y Competitividad (CP10/00502 e PI13/00935 a M. Vicario). CIBERehd è finanziato dall'Instituto de Salud Carlos III.


    Guarda il video: ASAM LAMBUNG DAN SAKIT EMPEDU (Giugno 2022).